【摘 要】
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目的 研究miR-129对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法 选取乳腺癌SKBR3、AU565细胞系,建立过表达与敲低miR-129细胞系,将细胞分为Control-mimic组、miR-129-mimic组和miR-129-mimic+miR-mimic-shRNA组.采用RT-PCR检测SKBR3、AU565细胞系中miR-129的表达水平,CCK-8法检测SKBR3、AU565细胞系的增殖能力,通过划痕实验及Transwell实验测定SKBR3、AU565细胞系的迁移及侵袭能力.采用
【机 构】
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中国科学院大学深圳医院(光明)甲乳外科,广东 深圳 518000;中国科学院大学深圳医院(光明)肾内科,广东 深圳518000
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目的 研究miR-129对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法 选取乳腺癌SKBR3、AU565细胞系,建立过表达与敲低miR-129细胞系,将细胞分为Control-mimic组、miR-129-mimic组和miR-129-mimic+miR-mimic-shRNA组.采用RT-PCR检测SKBR3、AU565细胞系中miR-129的表达水平,CCK-8法检测SKBR3、AU565细胞系的增殖能力,通过划痕实验及Transwell实验测定SKBR3、AU565细胞系的迁移及侵袭能力.采用生物信息学和双荧光素酶报告系统检测miR-129与Twist1的互补结合位点,采用Western blot对miR-129是否是Twist1的转录靶点进行分析验证.结果 miR-129-mimic组SKBR3和AU565细胞中miR-129的表达水平显著高于Control-mimic组(P<0.05).miR-129-mimic组SKBR3和AU565细胞的增殖能力明显低于Control-mimic组(P<0.01),而miR-129-mimic+miR-mimic-shRNA组逆转了miR-129过表达导致的细胞增殖能力降低.与Control-mimic组比较,miR-129-mimic组中SKBR3和AU565细胞的迁移及侵袭能力明显下降(P<0.01).生物信息学软件分析显示,miR-129与Twist1的3\'-UTR端有互补结合位点,且双荧光素酶试验结果显示,miR-129-mimic组中WT-3\'Twist-UTR的荧光素酶活性明显低于Control-mimic组(P0.05);Western blot结果显示,与Control-mimic组比较,miR-129-mimic组SKBR3和AU565细胞中Twist1蛋白水平明显下降(P<0.01).结论 miR-129可通过靶向调节Twist1抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,是乳腺癌诊断及治疗的潜在靶点.
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