【摘 要】
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目的对我国临床分离的第一株鲍曼不动杆菌产生的碳青霉烯酶OXA-72在毕赤酵母表达系统中进行重组表达及分离纯化。方法提取临床分离的鲍曼不动杆菌菌株40的基因组DNA,PCR扩增o
【机 构】
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山东大学齐鲁医院加强医疗科教育部和卫生部心血管重构与功能研究重点实验室东营市人民医院呼吸科
【基金项目】
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山东省科技攻关计划(2006GG2202008),, 山东省医药卫生科技发展计划2005HW057
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目的对我国临床分离的第一株鲍曼不动杆菌产生的碳青霉烯酶OXA-72在毕赤酵母表达系统中进行重组表达及分离纯化。方法提取临床分离的鲍曼不动杆菌菌株40的基因组DNA,PCR扩增oxa-72全基因;将oxa-72基因双酶切回收后与毕赤酵母表达载体连接,重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定;电转化法将线性化的重组表达DNA转导入GS115感受态细胞,在Zeocin平板上筛选阳性转化子,并通过PCR和Western进行验证;对阳性克隆进行头孢硝噻吩实验,检测表达OXA-72的活性。用镍柱分离纯化OXA-72。结果
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