【摘 要】
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[目的]获得紫心甘薯IbMYB1基因上游启动子序列,对其进行生物信息学分析和功能验证.[方法]利用hi Tail-PCR技术克隆获得IbMYB1基因5\'端上游的一段DNA序列,命名为PIbMYB1.使用PlantCARE和PLACE在线软件对其进行生物信息学分析,并通过瞬时转化烟草叶片和稳定转化拟南芥植株进行GUS组织化学活性检测,以验证该启动子的功能.[结果]成功克隆获得了长度为2 183 bp的PIbMYB1片段,生物信息学分析结果表明该片段具有CAAT-BOX和TATA-BOX等启动子核心元件
【机 构】
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华南师范大学生命科学学院,广东省植物发育生物工程重点实验室,广东广州510631;华南师范大学生命科学学院,广东省植物发育生物工程重点实验室,广东广州510631;河南大学生命科学学院,河南开封475
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[目的]获得紫心甘薯IbMYB1基因上游启动子序列,对其进行生物信息学分析和功能验证.[方法]利用hi Tail-PCR技术克隆获得IbMYB1基因5\'端上游的一段DNA序列,命名为PIbMYB1.使用PlantCARE和PLACE在线软件对其进行生物信息学分析,并通过瞬时转化烟草叶片和稳定转化拟南芥植株进行GUS组织化学活性检测,以验证该启动子的功能.[结果]成功克隆获得了长度为2 183 bp的PIbMYB1片段,生物信息学分析结果表明该片段具有CAAT-BOX和TATA-BOX等启动子核心元件,还具有光、糖和赤霉素的响应元件以及MYB、bHLH等转录因子的结合位点.GUS组织化学活性检测结果表明,PIbMYB1(-2 183～-1 bp)和5\'缺失突变体PIbMYB1F1(-2 000～-1 bp)、PIbMYB1F2(-1 500～-1 bp)均能驱动GUS基因的表达.[结论]成功克隆获得了IbMYB1基因的启动子序列,其驱动IbMYB1基因表达的主要区域位于-2 183～-1 000 bp区段,该区域具有核心启动子元件、环境因子响应元件和MYB、bHLH等转录因子结合位点.
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