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【摘要】 目的：探讨耐万古霉素金黄色葡萄球菌的生物学特征改变对细菌鉴定的影响。方法：使用万古霉素体外诱导将一株异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（h-VRSA）诱导为耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA），观察金黄色葡萄球菌耐万古霉素后生物学特征及变化规律。结果：金黄色葡萄球菌耐药后色素、溶血环消失，菌落变小，导致手工法和仪器法细菌鉴定错误，对PCR检测鉴定没有影响。结论：金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后，生物学发生变化，容易导致细菌鉴定结果错误，应引起临床重视。
【关键词】 耐万古霉素；金黄色葡萄球菌；生物学特征；细菌检测
金黄色葡萄球菌是社区获得性肺炎的常见病菌，2002年首次报道耐万古霉素葡萄球菌，2004年JAMA在职报道毅力患者体内分离出该病菌，临床常用的检测及药敏试验未能检测出耐万古霉素金黄色葡萄球菌[1]，我院采用万古霉素体外诱导方法将1株，异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（h-VRSA）诱导为耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA），观察其生物学特点，现报告如下：
1资料和方法
1.1一般资料 标准金黄色葡萄球菌（ATCC 29216）和异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌分离菌株10833来源于我院检验科，血浆凝固酶（+），触媒（+），GPI编码：76134056712。
1.2方法卵磷脂吐温80琼脂，微量生化反应管，万古霉素纸片，盐酸万古霉素、MH琼脂、肉汤、GPI鉴定卡，聚合酶链反应（PCR）试剂、PCR扩增仪、ZF紫外分析仪。按照10827筛选方法操作，确认为h-VRSA，将该菌株接种于万古霉素选择性培养基内，诱导出VRSA，并接种于血琼脂平板、兔血浆、MH肉汤，观察菌落形态、溶血环及色素，应用手工法、仪器法、PCR法测定金黄色葡萄球菌基因序列[2]，采用菌谱分析法，检测对万古霉素的敏感性。
1.3 统计学处理 应用SPSS13．0软件进行统计学处理，计数资料以％表示，计量资料以(x±s)表示，组内和组间比较分别采用t检验和x2检验。P<0．05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 VRSA菌群特点与标准金黄色葡萄球菌比较见表1
表1 VRSA菌群特点与标准金黄色葡萄球菌比较
生物学形态 标准金黄色葡萄球菌 VRSA
菌落形态及大小 均匀 大小不均
溶血环 清晰、宽大 窄小、无
色素 淡黄 灰白
凝固酶 阳性 阴性
金黄色葡萄球菌耐药后色素、溶血环消失，菌落变小，凝固酶阴性。
2.2VRSA实验室检测分析见表2
表2VRSA实验室检测分析
鉴定方法 标准金黄色葡萄球菌 VRSA
手工法 金葡菌 溶血葡萄球菌
仪器法 金葡菌 溶血葡萄球菌
PCR 金葡菌 金葡菌
实验室常用细菌鉴定方法将其鉴定为溶血葡萄球菌或者模仿葡萄球菌，PCR检测方法能正确鉴定VRSA诱导菌。
2.3 VRSA药敏试验结果纸片法和仪器法对于h-VRSA和VRSA均能检测到，微量肉汤对VRSA能检測到，对h-VRSA容易漏诊。
3讨论
万古霉素通过与肽聚糖前体D-D丙氨酸-丙氨酸结合，组织转糖基和转肽作用，抑制细胞壁的合成，发挥杀菌作用，其耐药机制尚未明了，有资料报名，金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药机制不是单一的。细胞壁增厚是其主要耐药机制，增厚的细胞壁通过阻塞、亲密诱捕引起耐药，万古霉素与丙氨酸残基结合，阻塞其网状结构[3]，阻止万古霉素向细胞质膜渗透，同时细胞壁上增多的肽聚糖单体与万古霉素结合，大部分药物结合在细胞壁上，不能到达细胞质膜。金葡菌分泌一种肽，可以通过信息传导途径把耐药质粒转移到金葡菌体内。本次实验表明，VRSA生物学特性改变主要是细菌菌落变小，色素消失，溶血环消失，凝固酶转阴，细菌菌落变小，提示耐药菌培养时间延长。VRSA生物学特征改变，对细菌鉴定结果也产生影响，手工法和仪器法错误鉴定为溶血葡萄球菌和模仿葡萄球菌，在采用PCR技术检测VRSA的nuc基因[4]，特异性表达于金黄色葡萄球菌，可应用于VRSA和h-VRSA的鉴定，这说明耐药菌生物学特征改变导致仪器法和手工法检测错误，金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后，生物学发生变化，容易导致细菌鉴定结果错误，应引起临床重视。
参考文献
[1] 马筱玲，王敬华，李华，等．异质性万古霉素耐药葡萄球菌分离及生物学特性观察[J]．中华微生物学和免疫学杂志，2009，24(7)：583—586．
[2] 马筱玲．万古霉素敏感性减低的金黄色葡萄球菌[J]．中华检验医学杂志，2009，27(9)：620—622．
[3] Weigel LM ，Clewell DB，Gill SR，et a1．Genetic analy—sis of a high—Level vancomycin—resistant isolate ofStaphylococcus aureus[J]．Science，2008，302(28)：
1569-1571．
[4] 吴本权，唐英春，张扣兴，等．万古霉素异质性耐药葡萄球菌的分离及其药物敏感性分析[J].中国抗生素杂志，2009，27(2)：116—120．
【关键词】 耐万古霉素；金黄色葡萄球菌；生物学特征；细菌检测
金黄色葡萄球菌是社区获得性肺炎的常见病菌，2002年首次报道耐万古霉素葡萄球菌，2004年JAMA在职报道毅力患者体内分离出该病菌，临床常用的检测及药敏试验未能检测出耐万古霉素金黄色葡萄球菌[1]，我院采用万古霉素体外诱导方法将1株，异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（h-VRSA）诱导为耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA），观察其生物学特点，现报告如下：
1资料和方法
1.1一般资料 标准金黄色葡萄球菌（ATCC 29216）和异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌分离菌株10833来源于我院检验科，血浆凝固酶（+），触媒（+），GPI编码：76134056712。
1.2方法卵磷脂吐温80琼脂，微量生化反应管，万古霉素纸片，盐酸万古霉素、MH琼脂、肉汤、GPI鉴定卡，聚合酶链反应（PCR）试剂、PCR扩增仪、ZF紫外分析仪。按照10827筛选方法操作，确认为h-VRSA，将该菌株接种于万古霉素选择性培养基内，诱导出VRSA，并接种于血琼脂平板、兔血浆、MH肉汤，观察菌落形态、溶血环及色素，应用手工法、仪器法、PCR法测定金黄色葡萄球菌基因序列[2]，采用菌谱分析法，检测对万古霉素的敏感性。
1.3 统计学处理 应用SPSS13．0软件进行统计学处理，计数资料以％表示，计量资料以(x±s)表示，组内和组间比较分别采用t检验和x2检验。P<0．05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 VRSA菌群特点与标准金黄色葡萄球菌比较见表1
表1 VRSA菌群特点与标准金黄色葡萄球菌比较
生物学形态 标准金黄色葡萄球菌 VRSA
菌落形态及大小 均匀 大小不均
溶血环 清晰、宽大 窄小、无
色素 淡黄 灰白
凝固酶 阳性 阴性
金黄色葡萄球菌耐药后色素、溶血环消失，菌落变小，凝固酶阴性。
2.2VRSA实验室检测分析见表2
表2VRSA实验室检测分析
鉴定方法 标准金黄色葡萄球菌 VRSA
手工法 金葡菌 溶血葡萄球菌
仪器法 金葡菌 溶血葡萄球菌
PCR 金葡菌 金葡菌
实验室常用细菌鉴定方法将其鉴定为溶血葡萄球菌或者模仿葡萄球菌，PCR检测方法能正确鉴定VRSA诱导菌。
2.3 VRSA药敏试验结果纸片法和仪器法对于h-VRSA和VRSA均能检测到，微量肉汤对VRSA能检測到，对h-VRSA容易漏诊。
3讨论
万古霉素通过与肽聚糖前体D-D丙氨酸-丙氨酸结合，组织转糖基和转肽作用，抑制细胞壁的合成，发挥杀菌作用，其耐药机制尚未明了，有资料报名，金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药机制不是单一的。细胞壁增厚是其主要耐药机制，增厚的细胞壁通过阻塞、亲密诱捕引起耐药，万古霉素与丙氨酸残基结合，阻塞其网状结构[3]，阻止万古霉素向细胞质膜渗透，同时细胞壁上增多的肽聚糖单体与万古霉素结合，大部分药物结合在细胞壁上，不能到达细胞质膜。金葡菌分泌一种肽，可以通过信息传导途径把耐药质粒转移到金葡菌体内。本次实验表明，VRSA生物学特性改变主要是细菌菌落变小，色素消失，溶血环消失，凝固酶转阴，细菌菌落变小，提示耐药菌培养时间延长。VRSA生物学特征改变，对细菌鉴定结果也产生影响，手工法和仪器法错误鉴定为溶血葡萄球菌和模仿葡萄球菌，在采用PCR技术检测VRSA的nuc基因[4]，特异性表达于金黄色葡萄球菌，可应用于VRSA和h-VRSA的鉴定，这说明耐药菌生物学特征改变导致仪器法和手工法检测错误，金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后，生物学发生变化，容易导致细菌鉴定结果错误，应引起临床重视。
参考文献
[1] 马筱玲，王敬华，李华，等．异质性万古霉素耐药葡萄球菌分离及生物学特性观察[J]．中华微生物学和免疫学杂志，2009，24(7)：583—586．
[2] 马筱玲．万古霉素敏感性减低的金黄色葡萄球菌[J]．中华检验医学杂志，2009，27(9)：620—622．
[3] Weigel LM ，Clewell DB，Gill SR，et a1．Genetic analy—sis of a high—Level vancomycin—resistant isolate ofStaphylococcus aureus[J]．Science，2008，302(28)：
1569-1571．
[4] 吴本权，唐英春，张扣兴，等．万古霉素异质性耐药葡萄球菌的分离及其药物敏感性分析[J].中国抗生素杂志，2009，27(2)：116—120．