【摘 要】
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目的:利用打靶载体技术构建小鼠T279基因敲除胚胎干细胞模型。方法:订购含小鼠T279基因的129BAC质粒和PL452,PCR扩增Retrieving同源臂及loxp-neo-loxp片段,利用PL253质粒进行目
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目的:利用打靶载体技术构建小鼠T279基因敲除胚胎干细胞模型。方法:订购含小鼠T279基因的129BAC质粒和PL452,PCR扩增Retrieving同源臂及loxp-neo-loxp片段,利用PL253质粒进行目的片段的连接,并在EL350大肠杆菌中进行同源重组,构建T279打靶载体,将其电转染小鼠胚胎干细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组的阳性克隆。结果:经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定,T279打靶载体构建成功。Southern blot结果显示成功筛选到同源重组的敲除T27
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