【摘 要】
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利用定点突变方法,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Set,Tyr187→His,Lys300→His)及muk2(Ala175→Ser,Tyr187→His).两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL21中表达得到包涵体,
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利用定点突变方法,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Set,Tyr187→His,Lys300→His)及muk2(Ala175→Ser,Tyr187→His).两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL21中表达得到包涵体,经体外变复性,SP-Sepharose离子交换柱层析,Benzanmidine-Sepharose吸附除去双链尿激酶,得到的蛋白均为银染一条带,用人工合成的发色底物S2444测量muk1、muk2的动力学性质,muk1的内在酶活性比野生型pro-UK降低8倍,muk2的内在酶活性比野生型prm-UK降低2.5倍;它们经纤溶酶(plasmin)激活后的双链活性与pro-UK相比分别为muk1提高50%,muk2和pro-UK相当.在实验基础上讨论了pro-UK高内源性催化活性的机制及其结构基础.
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