论文部分内容阅读
目的 探讨亚低温预处理肝缺血再灌注损伤(HIRI)大鼠模型的保护作用机理.方法 将40只SD大鼠分为4组:假手术(Sham)组、HIRI组、亚低温处理(MH)组和MH+LY294002处理(MH+LY)组,每组10只,分别于肝缺血再灌注3、6、12、24 h后收集大鼠的血清及肝组织标本.采用Western Blot检测大鼠肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt,Ser308)蛋白的表达水平.采用TUNEL法和Western Blot检测分析肝组织中细胞凋亡和凋亡相关蛋白的表达水平.采用ELISA试剂盒检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平.采用全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT、AST活性.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验.结果 HIRI组p-PI3K、p-Akt的相对表达水平明显低于Sham组,差异均有统计学意义(q值分别为5.217、5.456,P值均<0.01);经亚低温处理后大鼠肝组织中p-PI3K、p-Akt的相对表达水平明显高于HIRI组,差异均有统计学意义(q值分别为10.434、14.116,P值均<0.01).HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠再灌注后3、6、12、24 h的血清AST、ALT活性明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P值均<0.001).TUNEL染色结果显示,HIRI组大鼠的细胞凋亡百分比[(42.25±3.50)％]明显高于Sham组[(3.21±0.5)％],差异均有统计学意义(q=10.187,P<0.01);相比于HIRI组,MH组明显下调了细胞凋亡百分比(12.42±1.3)％,差异有统计学意义(q=7.784,P0.05).Western Blot检测结果显示,与Sham组相比,HIRI组中抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下调,差异有统计学意义(q=2.101,P<0.05),促凋亡蛋白Bax、fas和fasl表达明显上调,差异均有统计学意义(q值分别为11.016、4.735、10.201,P值均<0.01),亚低温处理之后可明显下调HIRI对凋亡相关蛋白的调控作用.氧化指标检测结果显示,HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠肝组织中SOD、GSH-Px的表达水平均明显低于Sham组,差异均有统计学意义(P值均<0.05),而MDA在HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠肝组织中的表达水平均明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);MH组大鼠肝组织中SOD、GSH-Px的表达水平明显高于HIRI组,差异均有统计学意义(q值分别为2.894、2.731,P值均<0.05),但MDA的表达水平明显低于HIRI组,差异有统计学意义(q=5.888,P<0.05).此外,亚低温+LY294002处理明显下调了MH组对肝组织中SOD、MDA和GSH-Px表达的调控作用,差异均有统计学意义(q值分别为2.999、2.944、2.620,P值均<0.05).结论 亚低温对HIRI大鼠具有保护作用,其机制可能是通过激活PI3 K/Akt通路发挥下调肝细胞凋亡和增强体内抗氧化作用.