【摘 要】
：
目的 构建一种受肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67基因小干扰RNA(Ki67-E1B 55kDsiRNA)的新型增殖腺病毒.方法将含有H1启动子的Ki67-siRNA表达框插入E1B 55kD缺失增殖腺病毒载体pZD55中,构建pZD55-Ki67质粒.用G250启动子取代pZD55-Ki67的E1A启动子,构建双调控增殖腺病毒载体pZD-G250-Ki67.将pZD-G
【机 构】
：
221002,江苏,徐州医学院附属医院泌尿外科,221002,江苏,徐州医学院附属医院泌尿外科,221002,江苏,徐州医学院附属医院泌尿外科,徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室,徐州医学院肿瘤生物治疗
论文部分内容阅读
目的 构建一种受肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67基因小干扰RNA(Ki67-E1B 55kDsiRNA)的新型增殖腺病毒.方法将含有H1启动子的Ki67-siRNA表达框插入E1B 55kD缺失增殖腺病毒载体pZD55中,构建pZD55-Ki67质粒.用G250启动子取代pZD55-Ki67的E1A启动子,构建双调控增殖腺病毒载体pZD-G250-Ki67.将pZD-G250-Ki67与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12 d后出现病毒空斑.提取重组腺病毒的DNA、聚合酶链反应(PCR)鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD-G250-Ki67.鉴定、扩增、纯化、测病毒滴度.结果成功构建G250启动子调控E1B 55kD蛋白编码基因缺失的表达Ki67-siRNA的双调控增殖型腺病毒ZD-G250-Ki67.病毒滴度为2×1011PFU/ml.结论成功构建的ZD-G250-Ki67为利用Ki67-siRNA靶向肾癌治疗奠定基础。
其他文献
内皮素1(ET1)在正常胚胎发育过程中起重要作用,与神经嵴细胞的发生有关,ET1基因敲除老鼠表现出主动脉弓畸形和室间隔缺损[2].ET1 TaqI单核苷酸多态性为内含子4的8000位点T/C的转换,可能引起ET1表达的差异,因此可能与先天性心脏病的易感性有关.我们运用PCR-RFLP的方法,以医院为基础的病例对照研究,探讨ET1 TaqI多态性与膜周部室缺发生的易感性。
目的 监测围手术期炎症因子和心肌酶谱的变化,比较心脏移植与冠状动脉搭桥手术(CABG)的炎症反应和心肌损伤的变化.方法11例心脏移植患者为体外循环(CPB)心脏移植组,同期选择20例因缺血性心脏病行择期行CABG的患者为体外循环非心脏移植组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测围手术期肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-8,肌酸激酶同功酶(CK-MB)和心肌钙蛋白Ⅰ(cT
目的 观察人肝细胞性肝癌(HCC)及门静脉癌栓(PVTT)组织蛋白质表达谱的改变,筛查在转移中起重要作用的关键蛋白质分子.方法 用双向凝胶电泳(2-DE)对3对HCC组织及PVTT组织的总蛋白质进行分离,两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定,并用组化和荧光定量聚合酶链反应(PCR)进一步验证.结果 鉴定出10个差异表达蛋白,包括Ki-67、MTH-SP75、NM23等.对在M组织中表达显著增高的
目的 观察硼替佐米(PS-341)对小鼠重症急性胰腺炎(SAP)的治疗作用.方法 将40只ICR雌性小鼠随机分为PS-341治疗组(注射脂多糖前0.5h腹内注射0.5 mg/kg PS-341)、模型对照组(注射脂多糖前0.5 h腹内注射50%DMSO)、空白对照组(生理盐水制模),采用连续7次腹内注射雨蛙素(每次间隔1h)及脂多糖制作小鼠SAP模型.最后一次注射雨蛙素后2 h麻醉小鼠,自右颈静脉
目的 观察趋化因子受体CXCR4及CCR7在不同侵袭能力人胃癌细胞株中的差异表达.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析CXCR4及CCR7在人胃癌细胞株MGC803、AGS、BGC823、SGC7901的表达;体外侵袭实验测定4株胃癌细胞的侵袭能力.结果 MGC803、AGS、BGC823、SGC7901中CXCR4 mRNA相对表达量分别为:1.2556±0.
目的 观察重组腺相关病毒（rAAV）-内皮抑素（Endostatin，ES）（简称rAAV—ES）基因治疗膀胱癌的效果。方法3＂24细胞悬液接种于BALB／C裸鼠右侧肩胛区皮下，取已成瘤裸鼠随机分为3组：对照组、rAAV-多克隆位点（MCS）组、rAAV—ES组，每组5只，分别瘤内注射生理盐水、rAAv—MCS及rAAV—ES，4周后处死荷瘤裸鼠，取出移植瘤，常规苏木素-伊红（HE）染色、计算微血
目的 双足鼠脊柱侧凸模型是一种理想的脊柱侧凸动物模型.目前建模手术方法死亡率较高.本研究拟从手术方法上探究提高建模手术成功率的方法.方法 在15只1个月龄大鼠中,采用双上肢去神经和右侧肋骨栓系(4-0无创缝线)法建模,术中不分离脊旁肌.观察死亡率.结果 术中肋骨栓系时,所有大鼠膈肌活动良好,未出现气胸或大血管损伤.无大鼠在手术中或术后一周内死亡.结论 建模术中不分离脊旁肌、右侧肋骨栓系和栓系用4-
目的 观察肺癌细胞中5型腺病毒(Ad5)及改良Ad5(Ad5F35)受体CAR和CD46的表达,探讨它们与Ad5、Ad5F35型腺病毒感染效率的关系.方法 采用流式细胞术检测人肺癌细胞株及10例原代培养肺癌细胞中CAR和CD46的表达水平.以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记的Ad5和Ad5F35型腺病毒按10和50的感染强度(MOI)感染上述细胞,48 h后通过流式细胞术检测GFP表达阳性细胞百分率
目的 探讨共刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达与预后的关系.方法 应用免疫组织化学染色,检测156例胃癌患者手术标本中B7-H4的表达;应用生物技术,体外诱导自体细胞因子激活的杀伤细胞(CIK)进行免疫治疗胃癌.结果 B7-H4在胃癌组织中阳性表达率为44.9%;单因素分析显示,B7-H4的表达与性别、年龄、组织学类型、病理分级、肿瘤大小等均无明显相关;但浸润深度和淋巴结转移与B7-H4阳性表达
目的 探讨动态监测α1-酸性糖蛋白(α1-AGP)和超敏C-反应蛋白(HsCRP)在急性胰腺炎(AP)早期严重度评估中的价值.方法 74例AP患者(23例重症患者和51例轻症患者)在入院后动态检测血清α1-AGP、HsCRP水平和进行APACHEⅡ评分及增强CT检查,并对结果进行对照分析.结果 重症组和轻症组患者在住院期间α1-AGP和HsCRP水平变化在同一时比较差异均有统计学意义(P<0.01