【摘 要】
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目的获得重组katG(简称rkatG)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值.方法应用基因工程技术表达、纯化katG蛋白,通过Westem blotting分析其抗原性,分别以
【机 构】
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中国人民解放军第三O九医院结核病研究室,北京100091
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目的获得重组katG(简称rkatG)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值.方法应用基因工程技术表达、纯化katG蛋白,通过Westem blotting分析其抗原性,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rkatG蛋白为抗原,通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体.结果重组质粒pET24b-katG 在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的28.2%～56.3%左右,分子质量约为80 000,Western blotting分析与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性.纯化后的rkatG样品经SDSPAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为92.75%,每100 ml培养菌可获得28 mg左右的重组蛋白.以33例正常人血清的OD值+2 s为正常界限值,一步法的特异性和敏感性分别为87.9%(29/33),65.6%(21/32);PPD分别为93.9%(31/33),62.5%(20/32);rkatG分别为97.0%(32/33),15.2%(5/33).结论pET24b-katG大肠杆菌工程菌能以包涵体形式表达rkatG蛋白,该蛋白具有较高的抗原特异性,但检测抗结核抗体的灵敏度低.
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