论文部分内容阅读
目的 分离与鉴定甲型H1N1流感病毒感染犬肾(MDCK)细胞外泌体.方法 以甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞,采用间接免疫荧光法确定最佳外泌体收集时间;通过沉淀法和免疫磁珠法相结合提取分离外泌体,并采用透射电镜观察形态并检测粒径,以Western blot鉴定标志蛋白.结果 病毒接种24 h后,>90% MDCK细胞被流感病毒感染,95%细胞保持活性,选取感染24 h作为外泌体收集时间点;透射电镜检测发现,流感病毒-外泌体呈圆形囊泡状,直径约30?150 nm;粒径检测结果显示,外泌体粒径主峰85.1 nm,平均111.3 nm,分布较均匀;Western blot表明流感病毒-外泌体表达标志性蛋白为CD63和TSG101.结论 成功从甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞分离出外泌体,鉴定发现纯度较高,为进一步研究外泌体在甲型流感病毒感染过程中的作用奠定了基础.