小鼠核因子kB受体活化因子配基（RANKL）活性区cDNA在毕赤酵母中分泌型表达

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sep

【摘要】

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由小鼠骨组织提取总RNA，采用RT-PCR扩增得到小鼠按因子kB受体活化因子配基(RANKL)活性区域cDNA．将该cDNA片段克隆入表达栽体pPIC9，重组栽体转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞，筛选Mut^

【作者】

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王宝利郭刚梁东春赵学勤张镜宇邱明才

【机构】

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天津医科大学总医院天津医科大学内分泌所

【出处】

：

中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

2003年4期

【关键词】

：

小鼠核因子kB受体活化因子配基活性区 CDNA 毕赤酵母分泌型表达 receptor activator of nuclear factor κB lig

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由小鼠骨组织提取总RNA，采用RT-PCR扩增得到小鼠按因子kB受体活化因子配基(RANKL)活性区域cDNA．将该cDNA片段克隆入表达栽体pPIC9，重组栽体转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞，筛选Mut^+表型，经甲醇诱导实现目的基因的分泌型表达．Tricine-SDS-PAGE显示，表达产物约26kD，经westem印迹鉴定，表达产物可被RANKL．抗体识别．采用硫酸铵盐析、CM-SephadexC-25层析纯化重组蛋白．经测定，发酵液上清重组蛋白表达量约11mg/L．采用破骨细胞样细胞(osteo

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