基于Red重组系统构建含Flag标签标记UL23基因的重组人巨细胞病毒

来源 :生物技术通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：df0225

【摘要】

：

利用来源于λ噬菌体的Red系统,将Flag标签及两侧带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段插入原HCMV TowneBAC中UL23基因3＇末端区域,通过卡那抗性筛选带有抗性标记的重组菌株,并通

【作者】

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胡嘉淼肖静刘明亮曾宝娟李婧惠李继东周天鸿冉艳红

【机构】

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暨南大学生命科学技术学院生物工程学系

【出处】

：

生物技术通报

【发表日期】

：

2012年2期

【关键词】

：

UL23人巨细胞病毒 RED同源重组 pKD46 pCP20 UL23 HCMV Red-mediated recombination pKD46 pCP20

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目（30770106）,国家自然科学基金重大研究计划面上项目（90608024）, 广东省自然科学基金项目（06025162）, 暨南大学科研培育与创新基金青年基金项目（11611711）

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利用来源于λ噬菌体的Red系统,将Flag标签及两侧带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段插入原HCMV TowneBAC中UL23基因3＇末端区域,通过卡那抗性筛选带有抗性标记的重组菌株,并通过表达重组酶FLP的质粒pCP20去除卡那霉素抗性基因,得到带有Flag标签标记UL23基因和单一FRT位点的突变BAC。重组后的BAC分子同质粒pcDNA3.1（＋）-pUL82共转染HFF细胞后重建重组HCMV。Western blotting检测证实所构建重组病毒能够表达含Flag标签标记的pUL23蛋白。此含

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