【摘 要】
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目的 克隆结核分枝杆菌Rv3803c和Rv846基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中进行表达和纯化.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组 DNA为模板,应用PCR方法扩增出Rv803c和R73846基因片段
【机 构】
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暨南大学医学院微生物与免疫学系,广东省结核病控制中心,广东省佛山市第四人民医院
【基金项目】
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“十一五”国家科技重大专项;“十二五”国家科技重大专项;“十二五”广东省“结核病防治转化”医学重点实验室
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目的 克隆结核分枝杆菌Rv3803c和Rv846基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中进行表达和纯化.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组 DNA为模板,应用PCR方法扩增出Rv803c和R73846基因片段,克隆至pGEX-6P-1表达载体中,测序正确后,在E.coli Rosetta中诱导表达,GST标签亲和层析法纯化蛋白,考马斯亮蓝染色及Western-blot分析鉴定.结果 重组质粒pGEX- Rv3803c、pGEX-R v3846测序表明核苷酸序列与设计完全一致.其在E.coli Rosetta中的存在形式均为可溶部分约50％、包涵体约50％,相对分子质量约为56000和45000,纯化的GST-Rv3803c、GST-Rv3846样品纯度90％以上.完整的GST-Rv3803c的浓度大约为0.1 mg/ml,完整的GST-Rv3846的浓度大约为0.5 mg/ml.即相当于每升E.coli Rasetta培养物中,GST-Rv3803c产量为:0.25mg/L、GST-Rv3846产量为1.25 mg/L.结论 成功获得了纯化蛋白Rv3803c(MPT51)和Rv3846(SodA),为进一步研究MPT-51和SodA蛋白的辅助诊断价值、构建保护性疫苗提供了实验依据.
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