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目的
探讨miR-193a-3p在食管鳞癌放射耐受性机制中的作用。
方法通过6 MV X射线对4个食管癌细胞系进行照射,采用MTT法检测出相对敏感系及耐受系细胞;茎环引物实时定量PCR法检测miR-193a-3p、miR-155、miR-22-3p在2个细胞中的表达,miR-193a-3p作为表达差异较为明显的microRNA被挑选进行下一步研究。分别合成并转染miR-193a-3p的mimic (3PM)或antagomiR (3PA)序列及小干扰RNA (si-LOXL4)以提高或抑制其在细胞中的表达水平,MTT法和流式细胞分析术检测miR-193a-3p及其下游基因LOXL4对于放射敏感性的影响。
结果筛选出相对放射敏感细胞系(KYSE510)及耐受细胞系(KYSE410);miR-193a-3p在两系细胞中的表达水平差异显著高于miR-155、miR-22-3p (1.00∶21.13);KYSE510细胞中转染mimic提高其表达后,与对照组相比,其放射敏感性降低,细胞凋亡比例显著下降11.10%(P<0.05),而KYSE410细胞中转染antagomiR后,其敏感性增加(P<0.05)。作为miR-193a-3p的下游基因,LOXL4的表达抑制也受到miR-193a-3p的调控,转染si-LOXL4降低其表达,与对照组相比放射敏感性也降低,细胞凋亡比例下降7.07%(P<0.05)。
结论miR-193a-3p可能通过调控基因LOXL4促进食管癌细胞放射耐受性。