【摘 要】
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目的:建立和优化检测ABCG2 34G>A多态性的等位基因特异性PCR方法(allele-specific PCR,AS-PCR),并对100例健康受试者进行分型检测。方法:设计合成3’-末端错配引物和包含内部
【机 构】
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中南大学临床药理研究所; 皖南医学院弋矶山医院临床药学部,安徽省药物临床评价中心; Department of Medicine of Weill Cornell Medical
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81072706,81173134);湖南省科技计划项目(2013FJ3036);安徽省自然科学基金项目(1408085MH163)
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目的:建立和优化检测ABCG2 34G>A多态性的等位基因特异性PCR方法(allele-specific PCR,AS-PCR),并对100例健康受试者进行分型检测。方法:设计合成3’-末端错配引物和包含内部错配位点的3’-末端错配引物,进行AS-PCR扩增,比较两者的扩增特异性,应用AS-PCR检测100例健康受试者ABCG2 34位多态型,采用焦磷酸测序方法(pyrosequencing)进行抽样验证。结果:含有第3位内部错配位点的3’-末端错配引物扩增特异性明显优于含有第2位内部错配位点以及不含内部错配位点的3’-末端错配引物。100例样本AS-PCR分型结果与同批标本前期的焦磷酸测序结果一致。ABCG2 34AA,34GA和34GG型频率分别为7%、32%、61%。结论:本文所建立的AS-PCR方法在进行ABCG2 34位多态分型时,具有省时、快速和成本低等优点,经过在引物中引入内部错配位点等优化设计后,分型结果准确可靠,适合临床应用。
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