【摘 要】
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半枫荷(Semiliquidambar cathayensis Chang)是中国特有濒危保护植物.为了利用ISSR分子标记对其开展遗传多样性研究,本研究针对Mg2+浓度、引物浓度、dNTPs浓度、DNA模板量、Taq DNA聚合酶总量这5个因素,通过单因素试验结合L16(45)正交试验对半枫荷ISSR-PCR反应体系进行优化.得到20 μL最优体系为:Mg2+2.5 mmol/L、引物0.3 μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、模板 DNA 40 ng、Taq DNA 聚合酶2 U、2 μL
【机 构】
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广州大学生命科学学院,广州,510006
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半枫荷(Semiliquidambar cathayensis Chang)是中国特有濒危保护植物.为了利用ISSR分子标记对其开展遗传多样性研究,本研究针对Mg2+浓度、引物浓度、dNTPs浓度、DNA模板量、Taq DNA聚合酶总量这5个因素,通过单因素试验结合L16(45)正交试验对半枫荷ISSR-PCR反应体系进行优化.得到20 μL最优体系为:Mg2+2.5 mmol/L、引物0.3 μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、模板 DNA 40 ng、Taq DNA 聚合酶2 U、2 μL 10×PCRBuffer.利用该体系筛选出7条扩增产物稳定、多态性好的引物(UBC811,UBC815,UBC817,UBC826,UBC827,UBC848,UBC849)作为ISSR-PCR扩增引物.在此基础上,对4份半枫荷材料进行扩增验证,共扩增出63个条带,其中多态性条带58个,多态性百分率为92.06％,平均Nei\'s基因多样性指数为0.384 9,Shannon\'s信息多样性指数为0.559 2,结果表明优化体系稳定性强,扩增效果较好,可用于半枫荷遗传多样性研究.
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