【摘 要】
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为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CM
【机 构】
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广西兽医研究所广西畜禽疫苗重点实验室,军事医学科学院军事兽医研究所,吉林大学畜牧兽医学院
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为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包装出含有GP5和M基因的重组腺病毒rAd5-GP5-M.应用PCR技术、间接免疫荧光、Western blot分析,结果表明,GP5和M基因已经被成功整合到了腺病毒基因组上,且GP5和M蛋白在293AD细胞上均得到了表达；滴度测定表明,该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/mL；连续传代试验表明该重组腺病毒可在细胞内稳定繁殖,有效地转录并表达GP5和M蛋白,具有较高的遗传稳定性.该研究为PRRSV重组腺病毒疫苗的研制打下了基础.
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