利用成簇的规律间隔的短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）／常间回文重复序列丛集关联蛋白系统（associated proteins，Cas）编辑纤连蛋白（fibronectin）基因抑制其可变剪接片段基因外显子A(extra domain A, EDA)，并观察对腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）的促肿瘤作用。
方法根据纤连蛋白序列设计两段互补于EDA上游和一段与下游互补的引导RNA（single guide RNA，sgRNA，20 bp），分别连接至PX330质粒的U6启动子下游。质粒转染至ACC细胞系SACC-83, PCR扩增基因组并测序验证其定点敲除EDA结果及效率。质粒转染后的细胞进行稳定株的筛选及鉴定，将筛选后的稳定株作为EDA敲除实验组，SACC-83细胞为对照组，进行CCK-8细胞增殖和Transwell侵袭能力检测，每组实验重复3次。
结果sgRNA连接至PX330质粒U6启动子下游，成功构建了质粒敲除模型；SACC-83的基因组EDA外显子被敲除，敲除效率达70％以上，但纤连蛋白总量未发生明显变化。筛选出3株EDA敲除稳定株（A+C-2、A+C- 6、B+C-10），并通过PCR鉴定证实其可靠性。划痕实验中实验组细胞运动速率[A+C-2(21.67± 1.87)µm/h; A+C-6(12.22±2.13)µm/h; B+C-10(20.00±2.56)µm/h]相对对照组[（27.78±3.20）µm/h]降低；增殖实验显示EDA敲除组细胞倍增时间增加[对照组SACC-83(38.52±4.26)h，实验组A+C-2(62.05± 5.80)h, A+C-6(46.32±6.35)h, B+C-10(40.7±3.88)h]。
结论在sgRNA的引导下，CRISPR/Cas系统能简洁、高效地敲除细胞基因组中的EDA可变剪接外显子，EDA敲除对肿瘤细胞运动和侵袭有明显抑制作用。