【摘 要】
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目的将TNF-α和IFN-β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC-7721,以增强其免疫原性. 方法以腺病毒为载体,以IRES连接TNF和IFN基因,选择HLA-B7可诱导启动子调控其表达.分别用Southern/Northern blot和MTT法检测TNF-α和IFN-β基因的整合、转录与表达.流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达.CTL细胞毒性实验检测T细胞对转染细胞的杀伤作用.细胞增殖实验检
【机 构】
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郑州大学消化疾病研究所,第二军医大学基础部微生物教研室,
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目的将TNF-α和IFN-β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC-7721,以增强其免疫原性. 方法以腺病毒为载体,以IRES连接TNF和IFN基因,选择HLA-B7可诱导启动子调控其表达.分别用Southern/Northern blot和MTT法检测TNF-α和IFN-β基因的整合、转录与表达.流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达.CTL细胞毒性实验检测T细胞对转染细胞的杀伤作用.细胞增殖实验检测目的基因的表达对肿瘤细胞的抑制作用. 结果 TNF-α和IFN-β基因可整合入转染细胞,并被有效转录.转染细胞MHCⅠ类分子的表达比对照组高3～4倍.TNF活性:Liu6细胞为3.778ng/ml,SMMC-7721为2.017pg/ml;24?h IFN最高活性分别为397.8U/106个细胞和345.8U/106个细胞.对照组与实验组在效靶比分别为5∶1,10∶1,15∶1时,CTL细胞毒性实验结果差异均有显著性(P＜0.05),表明T细胞杀伤作用明显增强.细胞增殖实验结果显示实验组与对照组差异有显著性(P＜0.05).目的基因的表达对肿瘤细胞具有一定的抑制作用,抑制率分别为5.5%(Liu6),3.7%(SMMC-7721). 结论人TNF-α和IFN-β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC-7721可明显增加其对TNF、IFN和MHCⅠ类分子的表达,增强机体对转染瘤细胞的杀伤作用.
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