【摘 要】
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目的 揭示人感染H7N9宿主血清HA抗体的产生及与其他HA亚型的交叉反应特性.方法 生物公司合成各亚型HA蛋白胞外域核苷酸序列,并克隆到改造过的pCDNA3.1载体上构建表达质粒.采
【机 构】
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广州医科大学附属广州市第八人民医院,广东广州,510060;佛山市顺德区第二人民医院,广东佛山,528305
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目的 揭示人感染H7N9宿主血清HA抗体的产生及与其他HA亚型的交叉反应特性.方法 生物公司合成各亚型HA蛋白胞外域核苷酸序列,并克隆到改造过的pCDNA3.1载体上构建表达质粒.采用哺乳动物细胞表达体系表达C端带标签的H1、H3、H5和H7重组HA蛋白.用抗标签的抗体捕获293T细胞转染上清中的HA蛋白.用建立的ELISA法检测22例H7N9感染者血清抗体与蛋白H1、H3、H5、H7(2013)和H7(2017)的结合反应,同时设H1N1感染组及健康对照组.结果 成功构建H1、H3、H5和H7重组HA蛋白表达质粒,表达蛋白大小约72000～100000 Mr.在检测的22例34份H7N9感染血清,对2013年及2017年分离的H7N9病毒株的HA蛋白均有显著结合[OD值=(1.85±0.27)、(1.54±0.27)],与健康对照组及H1N1组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).同时H7N9血清组与组1的H1、H5有交叉反应,OD值分别为(1.53±0.49)和(0.92±0.53),与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),与组2的H3有交叉反应[OD值=(2.09±0.22)],与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).而健康对照组与H1、H3有一定的结合反应,与H5、H7几乎不结合.结论 人感染H7N9病毒诱导的宿主血清HA抗体不仅与H7N9结合且与其他亚型HA蛋白有高度交叉反应,为广谱中和抗体的筛选及疫苗的研发提供了依据.
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