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背景：远交系的昆明小鼠作为中国自然科学研究主要实验动物,其胚胎干细胞建系的成功率一直很低.目的：探讨昆明小鼠胚胎干细胞体外分离培养的最佳方法和最适合的采胚时间.方法：采集孕3.5 d和4 d的囊胚分别以免疫外科法和全胚培养法在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上分离和克隆昆明小鼠胚胎干细胞集落.结果与结论：免疫外科法和全胚法培养3.5 d囊胚的内细胞团贴壁率和原代克隆形成率差异均不显著（P 〉 0.05）;全胚法培养4 d囊胚的内细胞团贴壁率显著高于免疫外科法（P 〈 0.05）,但原代克隆形成率显著低于免疫外科法