【摘 要】
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目的 利用酵母双杂交技术,寻找可能与谷氨酸受体亚型NR2D存在相互作用的蛋白,为探讨NR2D蛋白在神经系统退行性改变中的作用提供依据.方法 应用Clontech GAL4酵母双杂交系统,构建包含NR2D细胞内C末端的cDNA片段为诱饵质粒,筛选人脑cDNA文库;随机挑取部分阳性克隆,通过回复性杂交实验验证其可靠性,分离阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 筛选出6种与NR2D可能存在相互作用的蛋白,包括神经细胞膜糖蛋白(Glycoprotein M6B,GPM6B)、精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1(Sp
【机 构】
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中国医科大学转化医学研究院,教育部医学细胞生物学重点实验室,辽宁沈阳110013;中国医科大学附属盛京医院超声科,辽宁沈阳,110004
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目的 利用酵母双杂交技术,寻找可能与谷氨酸受体亚型NR2D存在相互作用的蛋白,为探讨NR2D蛋白在神经系统退行性改变中的作用提供依据.方法 应用Clontech GAL4酵母双杂交系统,构建包含NR2D细胞内C末端的cDNA片段为诱饵质粒,筛选人脑cDNA文库;随机挑取部分阳性克隆,通过回复性杂交实验验证其可靠性,分离阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 筛选出6种与NR2D可能存在相互作用的蛋白,包括神经细胞膜糖蛋白(Glycoprotein M6B,GPM6B)、精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1(Spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1,SAT1)、乳酸脱氢酶B(Lactate dehydrogenase B,LDHB)、α-突触核蛋白(α-synuclein,SNCA)、淀粉样蛋白β前体蛋白结合家族B成员1和2(Amyloid beta (A4) precursor protein-binding,family B,member 1 (Fe65),APBB1;Amyloid beta (A4) precursor protein-binding,family B,member 2,APBB2.结论 初步探讨了NR2D蛋白的功能及与其可能发生互作的蛋白,为进一步研究谷氨酸的兴奋性毒性参与神经系统退行性改变的机制奠定了实验基础.
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