【摘 要】
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目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348
【机 构】
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包头医学院基础医学与法医学院,内蒙古 包头014040;包头医学院神经科学研究所;内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室;包头医学院药学院;包头市第三医院;包头医学院神经科学研究所;内蒙古自治区低氧转化医
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目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.
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目的 探讨通过建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的糖尿病肾病大鼠炎症模型,观察黄芪汤能否通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,来改善糖尿病肾病大鼠的炎症因子表达.方法 选择48只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,即对照组、对照组+LPS组、模型组、模型+LPS组、黄芪汤干预组、黄芪汤+LPS组,动物造模采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ).检测大鼠病理、TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及其下游的相关蛋白的表达.结果 在糖尿病肾病大鼠和LPS+糖尿病肾
周细胞是与内皮细胞接触并部分包埋于血管基底膜的间充质细胞.周细胞具有分化能力,其表面标志物根据不同组织、不同发育阶段、不同病理生理环境而发生变化.研究表明,周细胞是肾脏肌成纤维细胞的主要来源,多种信号通路参与了周细胞/成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞的过程.本文综述了周细胞在肾间质纤维化发病机制中的研究进展,提出了周细胞作为靶点治疗肾间质纤维化的价值.
恶性肿瘤合并肾衰竭的患者在透析中常需抗肿瘤治疗.在抗肿瘤药物中,程序性细胞死亡蛋白-1 (programmed death-1,PD-1)抑制剂能有效恢复T细胞对肿瘤杀伤功能,目前已成为晚期恶性肿瘤主要的治疗方式.由于PD-1抑制剂临床使用时间不长,对其不良反应存在认识不足,尤其是在血液透析这类特殊人群中,目前文献未见相关不良反应报道.现报告重庆市黔江中心医院2例晚期恶性肿瘤患者在维持性血液透析期间,接受PD-1抑制剂卡瑞利珠单抗后出现严重全身皮疹伴瘙痒的不良反应情况.
目的:观察并评价鼠神经生长因子对奥沙利铂化疗所致外周神经毒性(CIPN)的预防和治疗效果.方法:选取2020年1月-2021年4月在本院行结直肠癌术后接受含奥沙利铂方案化疗的40例患者为研究对象,按随机分组表分为安慰剂组(0.9％生理盐水)和观察组(鼠神经生长因子),每组各20例,采用Levi专用神经毒性分级标准评定方法对所有患者进行外周神经毒性分级评价,比较两组的评分结果.结果:与安慰剂组相比,观察组患者Levi评分降低;感觉异常、迟钝等症状消失时间明显缩短,两组差异有统计学意义(P<0.05).结论:
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目的:探讨全膝关节置换术(total knee arthroplasty,TKA)后置管与否及不同置管时间对患者的影响.方法:回顾性研究了接受TKA治疗的患者220例,剔除中途丢失病例,现将200例接受TKA手术治疗的患者,分成A、B、C、D、E 5组,每组各40例,E组术后不放置引流管,A、B、C、D 4组分别夹闭引流管1、2、3、4 h后开放引流,5组均在引流量<50 mL后拔除引流管.观察各组临床指标及术后并发症发生情况.结果:(1)术后1 d和术后3 d,E组血红蛋白值高于A、B、C、D组(P0.
目的:探讨多科室协作模式治疗老年髋部骨折患者的临床效果.方法:回顾性分析2015年1月-2018年6月本院收治的老年髋部骨折患者资料,采取传统会诊模式诊疗的86例患者设为对照组,采取多学科协助模式诊疗的93例患者设为观察组,比较两组患者住院时间、术前等待时间、手术率以及48 h内手术率和并发症等差异.结果:观察组患者平均年龄高于对照组(P0.05);观察组患者平均住院时间短于对照组(P<0.05);观察组患者术前等待时间短于对照组(P<0.05));观察组患者48 h内手术比例高于对照组(P<0.05);
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