【摘 要】
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目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制.方法 MTT法测定NCTD 5～640 μmol·L-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印
【基金项目】
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北京中医药大学基金;北京中医药大学基金;北京中医药大学基金
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目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制.方法 MTT法测定NCTD 5～640 μmol·L-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0,6,30和60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD60 μmol· L-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L-1作用4h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRTPCR)测定NCTD 60 μmol· L-1作用BGC-823细胞6,12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达.Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响.结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24,48和72 h IC50分别为74.5,35.0和10.3 μmol·L-1.NCTD 6,30和60 μmol· L-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9％,47％和62％.NCTD对PDCD4mRNA表达无影响.与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响.NCTD 60 μmol-L-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P＜0.01).细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用.结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达.
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