观察钙化的人心脏瓣膜间质细胞(hVIC) Notch1蛋白表达的变化及其对细胞钙化的影响，并探讨其机制。
方法体外培养hVIC，将其分为2组，分别为正常对照组和诱导钙化组，前者常规培养，后者在常规培养的基础上加用β-甘油磷酸(500 μl)、抗坏血酸(200 μl)和地塞米松(100 μl)以诱导细胞钙化，2组细胞均培养7 d。另取上述方法诱导钙化的hVIC为钙化对照组，再设钙化抑制组，即为在钙化对照组的基础上加入Notch1特异性抑制剂DAPT 50 μmol/L(4 μl/孔)，2组细胞均培养7 d。4组均用脂多糖(LPS)诱导细胞的炎症反应。采用蛋白印迹法检测各组细胞内Notch1、磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB)、骨形态发生蛋白(BMP)-2和BMP-4的蛋白表达水平，ELISA法测定各组细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量，Von Kossa染色法观察各组细胞钙化的情况。
结果(1)诱导钙化组和正常对照组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2、BMP-4蛋白表达和细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量以及Von Kossa染色结果：诱导钙化组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2和BMP-4蛋白表达水平均明显高于正常对照组(P均<0.05)。诱导钙化组培养液上清中BMP-2蛋白含量为(88.23±3.28) pg/ml明显高于正常对照组的(25.41±3.68) pg/ml(P＝0.02)。Von Kossa染色可见诱导钙化组细胞形成大小不等的结节，胞质内的沉积物与细胞结节被染成黑色，提示有钙质沉积，而正常对照组细胞形态结构清晰，细胞周围无沉积物形成。(2)钙化对照组和钙化抑制组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2、BMP-4蛋白表达和细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量以及Von Kossa染色结果：钙化抑制组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2和BMP-4蛋白的表达水平均明显低于钙化对照组(P均<0.05)，钙化抑制组培养液上清中BMP-2蛋白的含量为(26.74±4.62) pg/ml明显低于钙化对照组的(80.41±2.96) pg/ml (P＝0.02)。Von Kossa染色可见钙化抑制组细胞钙结节明显少于钙化对照组。
结论钙化的hVIC Notch1蛋白高表达，促进了BMP-2和BMP-4蛋白表达增加，从而使hVIC发生成骨样改变，诱导细胞钙化，这一机制可能与NF-κB的活化有关。