【摘 要】
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目的探讨ras基因与鼻咽癌西妥昔单抗耐药的相关性。方法以人鼻咽癌细胞株5-8F细胞为研究对象,采用逐步增加剂量法诱导建立西妥昔单抗耐药细胞5-8F/Erbitux;MTT法检测西妥昔单
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目的探讨ras基因与鼻咽癌西妥昔单抗耐药的相关性。方法以人鼻咽癌细胞株5-8F细胞为研究对象,采用逐步增加剂量法诱导建立西妥昔单抗耐药细胞5-8F/Erbitux;MTT法检测西妥昔单抗对细胞的半数抑制浓度IC50,计算耐药指数(RI);Western Blot法检测细胞H-ras、K-ras的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测细胞ras-p21、H-ras以及K-ras基因的表达量;测序方法检测H-ras和K-ras基因第12、13、59、61密码子是否突变。结果建立了西妥昔单抗耐药的人鼻咽癌细胞系5-8F/Erbitux,西妥昔单抗作用3天和5天的RI分别为1.2和1.1;5-8F/Erbitux细胞H-ras和K-ras蛋白表达水平显著升高(P<0.001),H-ras基因表达量显著升高(P=0.016),K-ras基因表达量显著下降(P=0.000);ras-p21基因表达量有所升高,但差异不显著(P=0.113);通过比对,5-8F/Erbitux细胞H-ras基因、K-ras基因第12、13、59、61密码子均无突变。结论 H-ras基因扩增与过表达是导致5-8F/Erbitux细胞对西妥昔单抗耐药的主要机制之一。
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