【摘 要】
：
利用PCR技术克隆了人类-αactin基因的启动子(约450bp),尝试用去掉启动子的pEGFP-N1作为框架结构,成功构建了真核表达载体pEGFP-N1--αactin-P。应用Lipofectamine 2000将所
【机 构】
：
西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术中心
【基金项目】
：
国家“863”（2002AA216161）,国家自然科学基金（30200137）
论文部分内容阅读
利用PCR技术克隆了人类-αactin基因的启动子(约450bp),尝试用去掉启动子的pEGFP-N1作为框架结构,成功构建了真核表达载体pEGFP-N1--αactin-P。应用Lipofectamine 2000将所构建的pEGFP-N1--αactin-P转染入小鼠ES细胞。通过比较,发现在本实验室条件下,质粒DNA浓度以3.0~5.0μg/mL,转染时间约在2~3 h最佳。200μg/mL的G418较适宜于靶细胞的转染与筛选。得到表达心肌-αactin和GFP的小鼠ES细胞,基本维持小鼠ES细胞的形态。PCNA染色结果表明,转染后的小鼠ES细胞具有增殖能力。-αactin抗体免疫组化染色结果表明,转染后细胞表达-αactin和GFP,揭示构建的真核表达载体pEGFP-N1--αactin-P转染小鼠ES细胞,可能促进其向心肌细胞分化并对其筛选。
其他文献
本研究旨在获得猪GDF-11的特异性抗体,以便于进一步研究猪GDF-11的功能。对猪GDF-11的编码区进行了克隆、表达载体的构建和转化、原核诱导表达和纯化以及将GDF-11注射到小鼠
β-类淀粉蛋白42（amyloid-β42,Aβ42）聚集形成的可溶性寡聚体具有神经细胞毒性,是引起阿尔茨海默症的主要原因之一.通过浊度法、聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-po
目的探讨卡介菌多糖核酸注射液联合注射用炎琥宁治疗小儿手足口病的疗效。方法 104例手足口病患儿采用随机数字表法分为对照组及治疗组,各52例。对照组常规予注射用炎琥宁治
建立基于Verasonics^TM Vantage256超声开放系统的实验平台,用声辐射力激励角膜振动,通过快速平面波成像检测A0模式兰姆波的传播,根据兰姆波的频散特性估计牛眼角膜的剪切弹
安全壳是压水堆核电机组的第三道安全屏障,其主要作用是防止放射性物质向外界环境扩散。定期检查机组安全壳在反应堆失水事故(LOCA)压力下的泄漏率,是核电机组安全运行的重要
针对核电站某些系统或设备难以隔离导致安全阀无法定期校验或有效期超期,或因安全阀校验引发昂贵或废气介质排空、吹扫而造成资源浪费、环境污染及工作量大等共性问题,该文依
RCC-M M5110是核电站1~3级设备螺栓与驱动杆类构件用轧制或锻制棒材采购规范。规范中有部分材质硬度规定了最低和最高值范围;而有部分,特别是部分高强度钢却只规定了硬度的最
金融业支持县域经济发展的存在的不足1、信贷资金支持力度不够。国有商业银行县域网点萎缩，业务收缩，县级国有商业银行成为上级行的“储莆所”。2000年，兰西县工行、建行相继退
克隆了猪NPM1基因的cDNA和第4内含子序列，并利用生物信息学方法进行验证。所得cDNA序列全长1195bp且包含一个完整的开放阅读框，编码294个氨基酸。内含子序列长300bp，遵循GT／AG剪
为解决核电站部分阀门调试、维修、维护保养时手动启闭阀门劳动强度大、耗时长等问题,研制了阀门自动启闭装置,主要由动力源、传动模块、夹持模块、自固定模块构成。结合核级