【摘 要】
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节瘤拟杆菌是羊腐蹄病的主要致病因子,它能产生细胞外蛋白酶。本文所报道的是其中的一种蛋白酶(40 kDa)基因的亚克隆、在大肠杆菌中的高效表达以及 N-末端多肽序列。用Sphl+S
【机 构】
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农业部动物检疫所,澳大利亚维多利亚州兽医研究所
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节瘤拟杆菌是羊腐蹄病的主要致病因子,它能产生细胞外蛋白酶。本文所报道的是其中的一种蛋白酶(40 kDa)基因的亚克隆、在大肠杆菌中的高效表达以及 N-末端多肽序列。用Sphl+Scal 酶切原克隆(插入片段约为15kb),鸟枪法克隆于 pTZ18R 载体,用免疫学方法筛选其亚克隆文库,并用 SDS/聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其表达。然后纯化其亚克隆 DNA 片段,用Sau3AI 消化,克隆于 pKK_(?)启动子选择载体,进行启动子的分离和分析。用分光光度计方法定量测定 CAT(氯霉素乙酰转移酶)活性,从而确
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