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目的
探讨骨癌痛小鼠脊髓神经元微小RNA-212(miR-212)与cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化的关系。
方法SPF级雄性C3H/HeJ小鼠32只,4~6周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法将小鼠分为4组(n=8):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、骨癌痛+鞘内注射阴性对照锁核酸组(BC组)和骨癌痛+鞘内注射miR-212反义锁核酸组(BL组)。经股骨远端骨髓腔内注射含2×105个NCTC 2472细胞的α-最小必需培养基20 μl以制备骨癌痛模型。于接种后14 d时,BL组和BC组分别鞘内注射miR-212反义锁核酸和阴性对照锁核酸12 pmol/5 μl,1次/d,连续7 d。S组及BCP组鞘内注射等容量无核酸酶水。于接种前1 d、接种后4、7、10、14、21 d时测定自发抬足次数(NSF)和机械缩足反应阈(MWT)。于接种后21 d痛行为学测定结束后,取脊髓组织,采用Western blot法测定脊髓磷酸化CREB(p-CREB)和CREB的表达水平。
结果与S组相比,BCP组、BC组及BL组接种后7-21 d时MWT降低,NSF增加,脊髓p-CREB表达上调(P<0.05)。与BCP组相比,BL组接种后21 d时MWT升高,NSF减少,脊髓p-CREB表达下调(P<0.05),BC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。4组脊髓CREB表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。
结论脊髓神经元miR-212可能通过促进CREB磷酸化参与小鼠骨癌痛的维持。