【摘 要】
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目的制备鼠抗人PD-L1单克隆抗体(mAb)并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-PDL1融合蛋白免疫BALB/c小鼠,建立可稳定分泌抗PD-L1mAb的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western bl
【机 构】
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四川大学口腔疾病研究国家重点实验室,
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目的制备鼠抗人PD-L1单克隆抗体(mAb)并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-PDL1融合蛋白免疫BALB/c小鼠,建立可稳定分泌抗PD-L1mAb的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot鉴定mAb的特性,并测定其效价及Ig亚类。用免疫组织化学和流式细胞术分析其与干扰素-γ(IFN-γ)诱导的MDA-MB-231细胞表面PD-L1的结合能力。用CFSE标记外周血单个核细胞,通过流式细胞分析抗PD-L1单抗对抗原诱导的T细胞活化、增殖的影响。结果获得了一株可稳定分泌鼠抗人PD-L1mAb的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞培养上清效价为1:6400,腹水效价为1:102400,Ig亚类为IgG1。Western blot显示其能特异性结合重组GST-PDL1抗原。能与IFN-γ诱导表达的肿瘤细胞表面PD-L1结合,能封闭PD-1/PD-L1通路,促进抗原诱导的T细胞增殖反应。结论成功获得了具有高活性鼠抗人PD-L1杂交瘤及其分泌的mAb。
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