【摘 要】
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扩增鸭瘟病毒(DPV)生长非必需区的TK基因,并在其中间引入Bg1Ⅱ酶切位点,再之克隆到pUC19载体,获得载体pTK.用限制性内切酶从已有质粒pcDNA-LacZ上切下CMV启动子、多克隆位点,
【机 构】
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东北农业大学,青岛易邦生物工程有限公司,中国动物卫生与流行病学中心
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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扩增鸭瘟病毒(DPV)生长非必需区的TK基因,并在其中间引入Bg1Ⅱ酶切位点,再之克隆到pUC19载体,获得载体pTK.用限制性内切酶从已有质粒pcDNA-LacZ上切下CMV启动子、多克隆位点,SV40及LacZ的完整的基因表达盒,插入到pTK的TK基因中,获得质粒pTCL.用质粒T-VP1做模板,扩增出Ⅰ型鸭甲肝病毒(以前称为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒)VP1基因,克隆到质粒pTCL表达盒的多克隆位点KpnⅠ与XbaⅠ之间,构建含LacZ及VP1基因的转移载体质粒pT-CL-VP1.将此转移载体与鸭瘟病毒C-KCE毒株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经蓝斑克隆筛选和纯化,获得了遗传性状稳定的表达Ⅰ型鸭甲肝病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒.
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