【摘 要】
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目的:探讨凋亡诱导因子(AIF)在TAp63γ诱导细胞凋亡中的作用。方法:将质粒pcDNA3.1-TAp63γ转入人食管鳞癌EC9706细胞,抽提细胞DNA检测细胞是否凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,并
【机 构】
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郑州大学医学科学研究所,河南省分子医学重点学科开放实验室,郑州大学细胞生物学研究室,郑州大学生物工程系,郑州大学第一附属医院病理科
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目的:探讨凋亡诱导因子(AIF)在TAp63γ诱导细胞凋亡中的作用。方法:将质粒pcDNA3.1-TAp63γ转入人食管鳞癌EC9706细胞,抽提细胞DNA检测细胞是否凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,并用亚细胞器分离技术分析AIF的转位;利用化学合成及基因重组技术构建AIF发夹状RNA表达载体,western blot检测干扰效果并用流式细胞仪分析凋亡率的变化。结果:pcDNA3.1-TAp63γ转染细胞24h后出现DNA ladder,凋亡率为13.64%,并在pcDNA3.1-TAp63γ转染组中细胞质和细胞核蛋白中检测到AIF;而空载体转染组则无DNA ladder,凋亡率为1.37%,且此组的细胞质和细胞核蛋白尤其是核蛋白内无AIF信号。成功构建表达发夹状AIF-siRNA的载体,其干扰效率约为80%。转染pcDNA3.1-TAp63γ24h后,AIF-siRNA组的凋亡率是4.52%。结论:TAp63γ基因表达可诱导EC9706细胞凋亡;下调AIF的蛋白表达水平可降低TAp63γ诱导的细胞凋亡。
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