【摘 要】
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目的:构建CD40-siRNA慢病毒载体,检测其对小鼠巨噬细胞J774.1的感染效率及测定J774.1细胞的CD40 mRNA水平。方法:设计1段CD40的siRNA序列,构建慢病毒载体p LL3.7-CD40-siRNA,
【机 构】
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内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院风湿免疫科,内蒙古科技大学包头医学院
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目的:构建CD40-siRNA慢病毒载体,检测其对小鼠巨噬细胞J774.1的感染效率及测定J774.1细胞的CD40 mRNA水平。方法:设计1段CD40的siRNA序列,构建慢病毒载体p LL3.7-CD40-siRNA,与p MD2.G、p MDLg/pRRE和pRSV-REV按比例采用Lipofectamine LTX&Plus共转染293T细胞制备病毒,感染J774.1细胞后第4、6和8天时用流式细胞仪检测其感染效率,实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测CD40mRNA的表达水平。结果:成功构建CD40-siRNA慢病毒载体,当p LL3.7-CD40-siRNA、p MD2.G、p MDL g/p RRE和与pRSV-REV的比例为2∶1∶1∶1时,制备的慢病毒滴度最高;慢病毒感染J774.1细胞的效率呈时间依赖性,感染第8天时的感染效率最高;同时,p LL3.7-CD40-siRNA组CD40 mRNA的表达明显低于p LL3.7空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢病毒感染J774.1细胞的效率可以满足后续实验的要求,CD40-siRNA慢病毒载体可以抑制CD40mRNA的表达。
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