【摘 要】
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目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠原代培养肺成纤维细胞后内源性高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)细胞内移位及细胞外分泌的情况
【机 构】
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上海交通大学医学院附属仁济医院重症医学科 200127
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目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠原代培养肺成纤维细胞后内源性高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)细胞内移位及细胞外分泌的情况,并明确其在LPS诱导肺成纤维细胞异常增殖过程中的重要作用. 方法 ①将原代培养的小鼠肺成纤维细胞采用随机数字表法分为2组(每组3个孔),即PBS对照组(Con组)和LPS组(100μg/L),Western blot检测LPS刺激12 h后HMGB1乙酰化修饰的情况,同时采用免疫荧光检测HMGB1细胞内的定位情况.②将原代培养的小鼠肺成纤维细胞采用随机数字表法分为4组(每组3个孔),即PBS对照组(Con组)、100 μg/L LPS组(LPS100组)、250 μg/L LPS组(LPS250组)和500 μg/L LPS(LPS500组),于LPS刺激24 h后采用ELISA法检测上清液中HMGB1的含量.③采用随机数字表法将小鼠原代肺成纤维细胞分为4组(每组6个孔),NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)预处理细胞30 min后再分别使用LPS、HMGB1刺激细胞0、12、24 h和48 h,即PBS对照组(Con组)、LPS组(或HMGB1组)、PDTC组、LPS+PDTC组(或HMGB1+PDTC组),Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测细胞增殖情况. 结果 ①与Con组比较,LPS刺激细胞12h后,LPS组乙酰化HMGB1/总HMGB1明显升高(P＜0.05),同时细胞质中HMGB1表达明显增加.②LPS刺激细胞24 h后,LPS各组上清液中HMGB1含量较Con组明显升高(P＜0.05).③LPS刺激细胞24 h和48 h后,PDTC+LPS组细胞的光密度(D)值较LPS组明显降低(P＜0.05);HMGB1刺激细胞12、24 h和48 h后,PDTC+HMGB1组D值较HMGB1组均明显降低(P＜0.05). 结论 LPS可促进小鼠肺成纤维细胞核内HMGB1的主动分泌,进而通过活化NF-κB信号通路加速细胞增殖,可能是LPS诱导肺成纤维细胞异常增殖的重要机制.
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