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摘要：目的 优选独活葛根汤提取工艺。方法 以葛根素、芍药苷、蛇床子素含量及浸膏得率为指标，以溶媒用量、提取次数和提取时间为考察因素，采用正交试验优选最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为用10倍药材量的40%乙醇回流提取3次，每次60 min。结论 该提取工艺合理、稳定、可行，可为进一步开发利用该处方提供参考。
关键词：独活葛根汤；提取工艺；葛根素；芍药苷；蛇床子素
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）07-0060-03
独活葛根汤出自《外台秘要》卷十四注文引《范王方》。由葛根5 g，桂枝3 g，白芍3 g，麻黄2 g，独活2 g，地黄4 g，大枣1 g，甘草1 g，生姜1 g组成，用于治疗中柔风，身体疼痛、四肢缓弱欲不遂，及血虚兼外感，肩背强急、身体疼痛、四肢不遂等。葛根素、芍药苷、蛇床子素分别为葛根、白芍、独活的有效成分，其中葛根素具有扩张冠状动脉和脑血管、降血糖、抗氧化、保护心肌和脑神经以及治疗骨质疏松等药理作用[1]，芍药苷具有促进造血细胞增殖、调节免疫等药理作用[2]，蛇床子素为方中君药独活的主要镇痛、抗炎活性成分[3]。本研究以葛根素、芍药苷、蛇床子素及浸膏得率为指标，以溶媒用量、提取次数和提取时间为考察因素，采用正交试验优选最佳提取工艺，为进一步开发利用该处方提供参考。
1 仪器与试药
LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津），Solution工作站处理系统，二极管阵列检测器，Sartorius-CP225D电子分析天平（德国赛多利斯）。
葛根素对照品（批号110752-200912）、芍药苷对照品（批号110736-201035）、蛇床子素对照品（批号110822-200305）均购自中国药品生物制品检定所；药材均购自东营益生堂药店，由东营市药品检验所魏春芬副主任药师检定，符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）的规定（药材使用前均经60 ℃干燥，粉碎过80 目筛）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 浸膏得率的测定
按处方称取样品，加10倍量40%乙醇，回流提取60 min，过滤，残渣同法再提取2次，合并3次提取液，加5倍量95%乙醇，放置过夜，取上层醇液，下层3 000 r/min离心10 min，取上清液与前液合并，旋转蒸发仪回收乙醇浓缩至无醇味呈稠膏状，于60 ℃真空干燥的干浸膏。浸膏率计算公式：浸膏得率（%）=浸膏量（g）/药材量（g）。
2.2 葛根素和芍药苷含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇-0.05 mol/L醋酸铵-冰醋酸（15∶85∶0.5，V/V/V），流速为0.8 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为240 nm，进样量为10 ?L。
2.2.2 供试品溶液的制备 取按“2.1”项下方法制备的浸膏用甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，精密量取5.0 mL置50 mL量瓶中，甲醇稀释并稀释至刻度，摇匀，0.45 ?m微孔滤膜过滤，即得。
2.2.3 对照品贮备液的制备 分别精密称取葛根素对照品21.26 mg，芍药苷对照品20.50 mg置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得葛根素和芍药苷浓度分别为0.85 mg/mL和0.82 mg/mL的混合对照品贮备液。
2.2.4 对照品溶液的制备 精密量取对照品贮备液5.0 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得葛根素和芍药苷浓度分别为0.17 mg/mL和0.16 mg/mL的对照品溶液。
2.2.5 阴性对照溶液的制备 按处方称取不含葛根和白芍的阴性样品，加10倍40%乙醇，按供试品溶液制备方法制备，即得。
2.2.6 系统适用性试验 取对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图，葛根素与芍药苷分离度良好，阴性对照在2组分的出峰时间区域没有干扰峰，故对供试品的测定无干扰。
2.3 蛇床子素含量测定
方法见文献[4]。
2.4 样品含量测定
取正交试验项下的浸膏，分别按“2.2”和“2.3”项下方法测定葛根素、芍药苷和蛇床子素含量。
2.5 提取溶媒的选择
2.7 验证试验
按处方比例称取样品3份，按优选工艺条件进行重复性试验，测定葛根素、芍药苷、蛇床子素转移率[转移率（%）=浸膏中成分含量（mg/g）×浸膏重量（g）/原药材中成分含量（mg）]及浸膏得率，结果见表5。各项指标的RSD均<2.0%，各有效成分转移率均在80%以上，表明正交试验所筛选的工艺稳定、可重复操作。
关键词：独活葛根汤；提取工艺；葛根素；芍药苷；蛇床子素
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）07-0060-03
独活葛根汤出自《外台秘要》卷十四注文引《范王方》。由葛根5 g，桂枝3 g，白芍3 g，麻黄2 g，独活2 g，地黄4 g，大枣1 g，甘草1 g，生姜1 g组成，用于治疗中柔风，身体疼痛、四肢缓弱欲不遂，及血虚兼外感，肩背强急、身体疼痛、四肢不遂等。葛根素、芍药苷、蛇床子素分别为葛根、白芍、独活的有效成分，其中葛根素具有扩张冠状动脉和脑血管、降血糖、抗氧化、保护心肌和脑神经以及治疗骨质疏松等药理作用[1]，芍药苷具有促进造血细胞增殖、调节免疫等药理作用[2]，蛇床子素为方中君药独活的主要镇痛、抗炎活性成分[3]。本研究以葛根素、芍药苷、蛇床子素及浸膏得率为指标，以溶媒用量、提取次数和提取时间为考察因素，采用正交试验优选最佳提取工艺，为进一步开发利用该处方提供参考。
1 仪器与试药
LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津），Solution工作站处理系统，二极管阵列检测器，Sartorius-CP225D电子分析天平（德国赛多利斯）。
葛根素对照品（批号110752-200912）、芍药苷对照品（批号110736-201035）、蛇床子素对照品（批号110822-200305）均购自中国药品生物制品检定所；药材均购自东营益生堂药店，由东营市药品检验所魏春芬副主任药师检定，符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）的规定（药材使用前均经60 ℃干燥，粉碎过80 目筛）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 浸膏得率的测定
按处方称取样品，加10倍量40%乙醇，回流提取60 min，过滤，残渣同法再提取2次，合并3次提取液，加5倍量95%乙醇，放置过夜，取上层醇液，下层3 000 r/min离心10 min，取上清液与前液合并，旋转蒸发仪回收乙醇浓缩至无醇味呈稠膏状，于60 ℃真空干燥的干浸膏。浸膏率计算公式：浸膏得率（%）=浸膏量（g）/药材量（g）。
2.2 葛根素和芍药苷含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇-0.05 mol/L醋酸铵-冰醋酸（15∶85∶0.5，V/V/V），流速为0.8 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为240 nm，进样量为10 ?L。
2.2.2 供试品溶液的制备 取按“2.1”项下方法制备的浸膏用甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，精密量取5.0 mL置50 mL量瓶中，甲醇稀释并稀释至刻度，摇匀，0.45 ?m微孔滤膜过滤，即得。
2.2.3 对照品贮备液的制备 分别精密称取葛根素对照品21.26 mg，芍药苷对照品20.50 mg置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得葛根素和芍药苷浓度分别为0.85 mg/mL和0.82 mg/mL的混合对照品贮备液。
2.2.4 对照品溶液的制备 精密量取对照品贮备液5.0 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得葛根素和芍药苷浓度分别为0.17 mg/mL和0.16 mg/mL的对照品溶液。
2.2.5 阴性对照溶液的制备 按处方称取不含葛根和白芍的阴性样品，加10倍40%乙醇，按供试品溶液制备方法制备，即得。
2.2.6 系统适用性试验 取对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图，葛根素与芍药苷分离度良好，阴性对照在2组分的出峰时间区域没有干扰峰，故对供试品的测定无干扰。
2.3 蛇床子素含量测定
方法见文献[4]。
2.4 样品含量测定
取正交试验项下的浸膏，分别按“2.2”和“2.3”项下方法测定葛根素、芍药苷和蛇床子素含量。
2.5 提取溶媒的选择
2.7 验证试验
按处方比例称取样品3份，按优选工艺条件进行重复性试验，测定葛根素、芍药苷、蛇床子素转移率[转移率（%）=浸膏中成分含量（mg/g）×浸膏重量（g）/原药材中成分含量（mg）]及浸膏得率，结果见表5。各项指标的RSD均<2.0%，各有效成分转移率均在80%以上，表明正交试验所筛选的工艺稳定、可重复操作。