【摘 要】
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目的 构建小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)复制性衰老模型,检测衰老溶酶体相关功能改变,为衰老相关溶酶体疾病提供有效的细胞模型。方法 通过酶消化法分离提取MEF,体外连续传代培养构建MEF复制性衰老模型,实时定量PCR(qPCR)检测衰老标志物p16和p21,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色方法进一步验证衰老状态;通过溶酶体探针类染料LysoTracker Red DND-99探针及Lys
【基金项目】
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国家杰出青年科学基金项目(82025028);
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目的 构建小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)复制性衰老模型,检测衰老溶酶体相关功能改变,为衰老相关溶酶体疾病提供有效的细胞模型。方法 通过酶消化法分离提取MEF,体外连续传代培养构建MEF复制性衰老模型,实时定量PCR(qPCR)检测衰老标志物p16和p21,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色方法进一步验证衰老状态;通过溶酶体探针类染料LysoTracker Red DND-99探针及LysoSensor Yellow/Blue DND-160双激发探针追踪酸性溶酶体定性检测溶酶体酸碱性及定量检测溶酶体pH值;通过偶联自淬BODIPY?染料的牛血清白蛋白(DQ-BSA)检测衰老溶酶体的降解能力。结果 qPCR和SA-β-gal染色结果显示,MEF复制性衰老模型构建成功。与年轻P3代MEF相比,衰老P9代MEF溶酶体的酸性明显丧失,差异有统计学意义(P<0.0001),衰老P9代MEF溶酶体的降解能力明显降低(P<0.05)。结论 成功构建MEF复制性衰老细胞模型,并证明衰老MEF溶酶体的酸性丧失以及降解能力下降。
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圆柱体孔、轴是大量使用的基础零件,随着制造业的快速发展,对其尺寸与几何精度及其规范化标注的要求越来越高。对于圆柱体孔和轴,产品几何技术规范(GPS)除了对其规定尺寸公差和形状公差外,还规定了全局尺寸(包括最小二乘直径、最小外接直径、最大内切直径和最大最小直径)和计算尺寸(包括周长直径、面积直径和体积直径),本文基于课题组设计的圆柱体全局尺寸测量仪(后简称测量仪)主机功能要求,采用C++语言的MFC
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