双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立

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【摘要】

：

以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化.实验结

【作者】

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龚国春戴蕴平樊宝良赵春江王莉莉王海平郑敏李宁

【机构】

：

中国农业大学农业生物技术国家重点实验室

【出处】

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自然科学进展

【发表日期】

：

2002年12期

【关键词】

：

双标记选择载体牛胎儿成纤维细胞电击基因转染体细胞克隆转基因克隆

【基金项目】

：

北京市科技攻关项目，国家重点基础研究发展计划(973计划)

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以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化.实验结果表明,当电场强度为1.2kV/cm、脉冲时间为1ms时可获得约50个阳性细胞克隆/10 5 个细胞的最佳转染效率.通过牛胎儿成纤维细胞对不同浓度G418抗性的敏感性实验确定800μg/mL G418为快速筛选浓度,以300μg/mL G418为维持筛选浓度.从两个牛胎儿成纤维细胞系中共分离了56个绿色荧光蛋白(

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