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[摘 要] 目的：采用分析仪器对伊曲康唑进行特性鉴定，验证方法的准确性及可行性。方法：通过元素分析仪分析伊曲康唑的元素组成，利用紫外（UV）、红外（FTIR）、质谱（MS）、核磁共振碳谱（13C-NMR）、核磁共振氢谱（1H-NMR）、氢氢相关谱（1H-1HCOSY）、碳氢相关谱（HMQC）、碳氢远程相关谱（HMBC）等对伊曲康唑进行结构分析，并结合热重-差热分析（TGA/DSC）和X射线粉末衍射进行晶型鉴定。结果：通过紫外、红外、质谱和核磁等实验证实了伊曲康唑的结构，并通过熔点、X射线粉末衍射和DSC等实验结果证实了伊曲康唑的晶型。结论：该方法准确可行，可对伊曲康唑进行特性鉴定，可为生产过程控制提供理论依据。
[关键词] 伊曲康唑；结构确证；晶型鉴定；特性鉴定
中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2016）06-087-04
DOI：10.11876/mimt201606033
伊曲康唑（itraconazole）由美国强生公司研制，主要通过抑制细胞色素P450氧化酶介导的麦角甾醇的合成，从而对抗深部真菌和浅表真菌[1]。伊曲康唑是一个由两对对映异构体组成的外消旋混合物，分子式为C35H38Cl2N8O4，分子量为705.64，结构式见图1。
图1 伊曲康唑的化学结构式
关于伊曲康唑的新剂型制备和药理作用方面的研究文献较多[2-3]，而关于其结构确证方面的文献资料尚不够完整[4-5]。该研究通过对伊曲康唑进行元素分析、紫外吸收光谱（UV）、红外吸收光谱（FTIR）、高分辨质谱（HR-MS）、核磁共振碳谱（13C-NMR）、核磁共振氢谱（1H-NMR）、核磁共振DEPT135°试验、氢氢相关谱（1H-1HCOSY）、碳氢相关谱（HMQC）、碳氢远程相关谱（HMBC）、热重-差热分析（TGA/DSC）和X射线粉末衍射分析，综合各分析结果对伊曲康唑进行特性鉴定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
德国elementar vario EL元素分析仪、HP 8453紫外分光光度计、美国Nicolet公司ThermoNicolet is5红外光谱仪、Agilent Technologies6520型 Accurate-Mass-Q-TOF LC/MS质谱仪、BRUKER AV-400超导核磁共振仪、D/max-2500 X射线粉末衍射仪、METTLER LOLEDO TGA-DSCI分析仪。
1.2 试药
所有核磁共振实验均以CDCl3为溶剂，TMS（四甲基硅烷）为内标。所有试剂均为分析纯。
1.3 样品
伊曲康唑样品[6]为某制药企业提供，批号Y1012026，经高效液相色谱法测定，符合结构确证所需纯度要求。对照品购自中国药品生物制品检定所（含量为99.93%），批号10631-200401。
2 测定方法与结果分析
2.1 理化性质
2.1.1 伊曲康唑为淡黄色粉末，按照中国药典第二部附录溶解度测定法测得，伊曲康唑不溶于水，在乙醇中微溶，二氯甲烷中易溶。
2.1.2 旋光度测定 取伊曲康唑供试品和对照品适量，加二氯甲烷溶解并定容量稀释成每1mL含0.1g的溶液，测得旋光度均为0.1°。
2.1.3 熔点测定 取伊曲康唑供试品和对照品适量，分别按照中国药典第二部附录VI C熔点测定方法第一法对伊曲康唑的熔点进行测定，结果表明伊曲康唑Y1012026样品和伊曲康唑对照品的熔点均为166℃。
2.2 有机元素分析
取伊曲康唑样品进行C、H、N元素分析，与理论基本计算值相符，见表1。
2.3 紫外吸收光谱
伊曲康唑样品在甲醇中的紫外吸收光谱显示，在262nm处有最大吸收（K带），236nm处有最小吸收。与中性溶液相比，伊曲康唑在0.1 mol/L的盐酸甲醇溶液中的最大吸收峰为259nm，最小吸收峰为238nm，并出现222nm的吸收峰；在0.1 mol/L的氢氧化钠甲醇溶液中的最大吸收峰为262nm，最小吸收峰为239nm。
2.4 红外光谱
按照中国药典2010年二部对仪器进行校正，符合规定。采取KBr压片制样。
伊曲康唑的红外光谱表明，化合物含有苯环、甲基、亚甲基、芳香酮、醚键和苯环的间位、对位取代，具体的红外数据与归属见表2。
2.5 高分辨质谱
采用高分辨质谱（ESI源）进行分析。伊曲康唑质谱的m/z为分子离子峰[M+H]+，m/z为705.2462，与分子量705.2465一致。伊曲康唑的ESI-MS质谱图见图2。
2.6 核磁共振谱
1H-NMR观测频率为400.13M Hz，1H90°脉冲宽度为13.6μs；13C-NMR观测频率为100.62M Hz，13C90°脉冲宽度为6.5μs。
2.6.1 1H核磁共振谱 伊曲康唑样品的具体1H-NMR数据见表3，1H-NMR图谱见图3。结合1H-1HCOSY图谱、HSQC图谱和HMBC图谱，对1H核磁共振谱进行归属。
伊曲康唑样品的1H谱显示有38个质子，共有22组氢，从高场到低场各氢的积分比为3：3：1：1：4：4：1：2：1：1：1：2：2：2：2：1：2：1：1：1：1：1，与伊曲康唑结构相符，且与对照品一致。
2.6.2 13C核磁共振谱 伊曲康唑样品的具体13C-NMR数据见表4，核磁共振碳谱DEPT θ=135°见图4，13C-NMR谱见图5。
伊曲康唑13C图谱图谱上除溶剂峰（δ 76.68-77.31ppm）外共有29个峰，其中6个碳信号重合，实际有35个碳；由DEPT135°谱可知，分子中有8个仲碳和9个季碳，与伊曲康唑结构式相符。 2.7 X-射线粉末衍射及热分析
通过对伊曲康唑进行X-射线粉末衍射分析和热分析，伊曲康唑样品与对照品的衍射图中各衍射峰和强度一致。DSC分析结果显示，伊曲康唑的DSC曲线有一个吸收峰，样品与对照品的吸热峰峰顶温度均为167.86℃。TGA曲线中，在室温到150℃范围内，未见热失重峰，表明本品不含吸附水或结晶水/结晶溶剂。X-射线粉末衍射测定结果如表5。
2.8 晶型分析
根据伊曲康唑样品与对照品的熔点测定， X射线粉末衍射结果和DSC曲线，伊曲康唑样品Y1012026与对照品晶型一致。伊曲康唑样品Y1012026的X-粉末衍射结果中，其特征峰的衍射角2θ值为14.42°，17.4°，17.9°，20.36°，23.44°和25.3°；DSC曲线有一个吸收峰，吸热峰峰顶温度均为167.86℃。伊曲康唑样品的X射线粉末衍射图谱和DSC曲线对比结果如图6、7。
2.9 综合解析
经过对伊曲康唑的核磁共振一维、二维图谱的测定，可进一步确定目标化合物与伊曲康唑的分子结构式一致[7-8]，并通过对其进行紫外、红外光谱测定，质谱测定，确定目标化合物与伊曲康唑的结构式一致，旋光度为0.1°，表明为消旋体，其结构为（士）-1-仲丁基-4-[4-[4-[4-[[（2R* ， 4 S * ）2-（2，4-二氯苯基）-2-（lH-l，2，4-三氮唑基-1-甲基）-1，3-二氧环戊-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-△2 –l，2，4-三氮唑-5-酮。再通过对其进行X-射线粉末衍射和DSC的测定，确定其晶型与对照品一致，进一步为伊曲康唑的合成和质量控制提供了重要的参考依据。
3 讨论
3.1 伊曲康唑化合物中H15是受邻位H16、H18影响，氢谱峰应裂分为三重峰，但δ 4.318处为一组包含1个质子的多重峰，与δ 3.479，δ 3.793和δ 3.890处质子相关，且与δ 74.60处的叔碳相关，推断可能原因是由于C15为手性碳，影响H15的裂分，关于伊曲康唑化合物手性碳的研究还需进一步深入。
3.2 通过对比红外，DSC曲线和X-射线粉末衍射，伊曲康唑原料药的晶型与对照品一致。与Shankar等[9]对伊曲康唑原料药的晶型的研究相比，其DSC曲线、IR和X-射线粉末衍射结果一致，表明该伊曲康唑Y1012026样品晶型与对照品及文献资料一致。
3.3 试验证实该方法准确可行，可作为伊曲康唑的特性鉴定方法，为以后伊曲康唑的生产过程控制提供理论依据。
参 考 文 献
[1] 陈江飞，苗彩云，朱素燕.抗真菌药伊曲康唑的临床药理学研究进展[J].中国临床药理学杂志，2009，25（2）：153-156.
[2] OGAWA T， MATSUMOTO K， TSUJIMOTO K， et al. Chronic invasive sinus and intracerebral aspergillosis controlled by combination therapy with micafungin and a daily dose of 400 mg itraconazole oral solution[J]. J Infect Chemother， 2015， 21（2）： 134-137.
[3] GILANI K， DAMAN Z， MOAZENI E， et al. Preparation and characterization of various solid dispersion formulations of itraconazole to enhance the drug dissolution profile[J]. Drug Deliv Sci Tech， 2014， 24（6）： 659-664.
[4] INKMANN E， HOLZGRABE U. 1H and 13C nuclear magnetic resonance studies of the sites of protonation in itraconazole and fluconazole[J]. J Pharm Biomed Anal， 1999， 20（1-2）： 297-307.
[5] Shevchenko A， Miroshnyk I， Pietil? L O， et al. Diversity in Itraconazole Cocrystals with Aliphatic Dicarboxylic Acids of Varying Chain Length[J]. Crystal Growth & Design， 2013， 13（11）：4877-4884.
[6] KANDA N， KANO R， ISHIKAWA T， et al. The antimycotic drugs itraconazole and terbinafine hydrochloride induce the production of human β-defensin-3 in human keratinocytes[J]. Immunobiology， 2011， 216（4）： 497-504.
[7] 朱淮武.有机分子结构波谱解析[M].北京：化学工业出版社，2005：91.
[8] 陈合兵.核磁共振技术在药物定量分析和混合物结构鉴定中的应用[D].北京：军事医学科学院，2010.
[9] SWAMINATHAN S， SANGWAI M， WAWDHANE S， et al. Soluble itraconazole in tablet form using disordered drug delivery approach： critical scale-up considerations and bio-equivalence studies[J]. AAPS PharmSciTech， 2013， 14（1）： 360-374.
[关键词] 伊曲康唑；结构确证；晶型鉴定；特性鉴定
中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2016）06-087-04
DOI：10.11876/mimt201606033
伊曲康唑（itraconazole）由美国强生公司研制，主要通过抑制细胞色素P450氧化酶介导的麦角甾醇的合成，从而对抗深部真菌和浅表真菌[1]。伊曲康唑是一个由两对对映异构体组成的外消旋混合物，分子式为C35H38Cl2N8O4，分子量为705.64，结构式见图1。
图1 伊曲康唑的化学结构式
关于伊曲康唑的新剂型制备和药理作用方面的研究文献较多[2-3]，而关于其结构确证方面的文献资料尚不够完整[4-5]。该研究通过对伊曲康唑进行元素分析、紫外吸收光谱（UV）、红外吸收光谱（FTIR）、高分辨质谱（HR-MS）、核磁共振碳谱（13C-NMR）、核磁共振氢谱（1H-NMR）、核磁共振DEPT135°试验、氢氢相关谱（1H-1HCOSY）、碳氢相关谱（HMQC）、碳氢远程相关谱（HMBC）、热重-差热分析（TGA/DSC）和X射线粉末衍射分析，综合各分析结果对伊曲康唑进行特性鉴定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
德国elementar vario EL元素分析仪、HP 8453紫外分光光度计、美国Nicolet公司ThermoNicolet is5红外光谱仪、Agilent Technologies6520型 Accurate-Mass-Q-TOF LC/MS质谱仪、BRUKER AV-400超导核磁共振仪、D/max-2500 X射线粉末衍射仪、METTLER LOLEDO TGA-DSCI分析仪。
1.2 试药
所有核磁共振实验均以CDCl3为溶剂，TMS（四甲基硅烷）为内标。所有试剂均为分析纯。
1.3 样品
伊曲康唑样品[6]为某制药企业提供，批号Y1012026，经高效液相色谱法测定，符合结构确证所需纯度要求。对照品购自中国药品生物制品检定所（含量为99.93%），批号10631-200401。
2 测定方法与结果分析
2.1 理化性质
2.1.1 伊曲康唑为淡黄色粉末，按照中国药典第二部附录溶解度测定法测得，伊曲康唑不溶于水，在乙醇中微溶，二氯甲烷中易溶。
2.1.2 旋光度测定 取伊曲康唑供试品和对照品适量，加二氯甲烷溶解并定容量稀释成每1mL含0.1g的溶液，测得旋光度均为0.1°。
2.1.3 熔点测定 取伊曲康唑供试品和对照品适量，分别按照中国药典第二部附录VI C熔点测定方法第一法对伊曲康唑的熔点进行测定，结果表明伊曲康唑Y1012026样品和伊曲康唑对照品的熔点均为166℃。
2.2 有机元素分析
取伊曲康唑样品进行C、H、N元素分析，与理论基本计算值相符，见表1。
2.3 紫外吸收光谱
伊曲康唑样品在甲醇中的紫外吸收光谱显示，在262nm处有最大吸收（K带），236nm处有最小吸收。与中性溶液相比，伊曲康唑在0.1 mol/L的盐酸甲醇溶液中的最大吸收峰为259nm，最小吸收峰为238nm，并出现222nm的吸收峰；在0.1 mol/L的氢氧化钠甲醇溶液中的最大吸收峰为262nm，最小吸收峰为239nm。
2.4 红外光谱
按照中国药典2010年二部对仪器进行校正，符合规定。采取KBr压片制样。
伊曲康唑的红外光谱表明，化合物含有苯环、甲基、亚甲基、芳香酮、醚键和苯环的间位、对位取代，具体的红外数据与归属见表2。
2.5 高分辨质谱
采用高分辨质谱（ESI源）进行分析。伊曲康唑质谱的m/z为分子离子峰[M+H]+，m/z为705.2462，与分子量705.2465一致。伊曲康唑的ESI-MS质谱图见图2。
2.6 核磁共振谱
1H-NMR观测频率为400.13M Hz，1H90°脉冲宽度为13.6μs；13C-NMR观测频率为100.62M Hz，13C90°脉冲宽度为6.5μs。
2.6.1 1H核磁共振谱 伊曲康唑样品的具体1H-NMR数据见表3，1H-NMR图谱见图3。结合1H-1HCOSY图谱、HSQC图谱和HMBC图谱，对1H核磁共振谱进行归属。
伊曲康唑样品的1H谱显示有38个质子，共有22组氢，从高场到低场各氢的积分比为3：3：1：1：4：4：1：2：1：1：1：2：2：2：2：1：2：1：1：1：1：1，与伊曲康唑结构相符，且与对照品一致。
2.6.2 13C核磁共振谱 伊曲康唑样品的具体13C-NMR数据见表4，核磁共振碳谱DEPT θ=135°见图4，13C-NMR谱见图5。
伊曲康唑13C图谱图谱上除溶剂峰（δ 76.68-77.31ppm）外共有29个峰，其中6个碳信号重合，实际有35个碳；由DEPT135°谱可知，分子中有8个仲碳和9个季碳，与伊曲康唑结构式相符。 2.7 X-射线粉末衍射及热分析
通过对伊曲康唑进行X-射线粉末衍射分析和热分析，伊曲康唑样品与对照品的衍射图中各衍射峰和强度一致。DSC分析结果显示，伊曲康唑的DSC曲线有一个吸收峰，样品与对照品的吸热峰峰顶温度均为167.86℃。TGA曲线中，在室温到150℃范围内，未见热失重峰，表明本品不含吸附水或结晶水/结晶溶剂。X-射线粉末衍射测定结果如表5。
2.8 晶型分析
根据伊曲康唑样品与对照品的熔点测定， X射线粉末衍射结果和DSC曲线，伊曲康唑样品Y1012026与对照品晶型一致。伊曲康唑样品Y1012026的X-粉末衍射结果中，其特征峰的衍射角2θ值为14.42°，17.4°，17.9°，20.36°，23.44°和25.3°；DSC曲线有一个吸收峰，吸热峰峰顶温度均为167.86℃。伊曲康唑样品的X射线粉末衍射图谱和DSC曲线对比结果如图6、7。
2.9 综合解析
经过对伊曲康唑的核磁共振一维、二维图谱的测定，可进一步确定目标化合物与伊曲康唑的分子结构式一致[7-8]，并通过对其进行紫外、红外光谱测定，质谱测定，确定目标化合物与伊曲康唑的结构式一致，旋光度为0.1°，表明为消旋体，其结构为（士）-1-仲丁基-4-[4-[4-[4-[[（2R* ， 4 S * ）2-（2，4-二氯苯基）-2-（lH-l，2，4-三氮唑基-1-甲基）-1，3-二氧环戊-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-△2 –l，2，4-三氮唑-5-酮。再通过对其进行X-射线粉末衍射和DSC的测定，确定其晶型与对照品一致，进一步为伊曲康唑的合成和质量控制提供了重要的参考依据。
3 讨论
3.1 伊曲康唑化合物中H15是受邻位H16、H18影响，氢谱峰应裂分为三重峰，但δ 4.318处为一组包含1个质子的多重峰，与δ 3.479，δ 3.793和δ 3.890处质子相关，且与δ 74.60处的叔碳相关，推断可能原因是由于C15为手性碳，影响H15的裂分，关于伊曲康唑化合物手性碳的研究还需进一步深入。
3.2 通过对比红外，DSC曲线和X-射线粉末衍射，伊曲康唑原料药的晶型与对照品一致。与Shankar等[9]对伊曲康唑原料药的晶型的研究相比，其DSC曲线、IR和X-射线粉末衍射结果一致，表明该伊曲康唑Y1012026样品晶型与对照品及文献资料一致。
3.3 试验证实该方法准确可行，可作为伊曲康唑的特性鉴定方法，为以后伊曲康唑的生产过程控制提供理论依据。
参 考 文 献
[1] 陈江飞，苗彩云，朱素燕.抗真菌药伊曲康唑的临床药理学研究进展[J].中国临床药理学杂志，2009，25（2）：153-156.
[2] OGAWA T， MATSUMOTO K， TSUJIMOTO K， et al. Chronic invasive sinus and intracerebral aspergillosis controlled by combination therapy with micafungin and a daily dose of 400 mg itraconazole oral solution[J]. J Infect Chemother， 2015， 21（2）： 134-137.
[3] GILANI K， DAMAN Z， MOAZENI E， et al. Preparation and characterization of various solid dispersion formulations of itraconazole to enhance the drug dissolution profile[J]. Drug Deliv Sci Tech， 2014， 24（6）： 659-664.
[4] INKMANN E， HOLZGRABE U. 1H and 13C nuclear magnetic resonance studies of the sites of protonation in itraconazole and fluconazole[J]. J Pharm Biomed Anal， 1999， 20（1-2）： 297-307.
[5] Shevchenko A， Miroshnyk I， Pietil? L O， et al. Diversity in Itraconazole Cocrystals with Aliphatic Dicarboxylic Acids of Varying Chain Length[J]. Crystal Growth & Design， 2013， 13（11）：4877-4884.
[6] KANDA N， KANO R， ISHIKAWA T， et al. The antimycotic drugs itraconazole and terbinafine hydrochloride induce the production of human β-defensin-3 in human keratinocytes[J]. Immunobiology， 2011， 216（4）： 497-504.
[7] 朱淮武.有机分子结构波谱解析[M].北京：化学工业出版社，2005：91.
[8] 陈合兵.核磁共振技术在药物定量分析和混合物结构鉴定中的应用[D].北京：军事医学科学院，2010.
[9] SWAMINATHAN S， SANGWAI M， WAWDHANE S， et al. Soluble itraconazole in tablet form using disordered drug delivery approach： critical scale-up considerations and bio-equivalence studies[J]. AAPS PharmSciTech， 2013， 14（1）： 360-374.