论文部分内容阅读
目的 观察微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对人结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建慢病毒介导的miR-338-3p及其抑制剂的表达载体并转染结直肠癌细胞株SW-620,流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p及其抑制剂的SW-620亚细胞株,利用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-338-3p表达,Western blot检测其靶基因Smoothened(SMO)蛋白表达水平,通过噻唑蓝比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态.结果 经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含miR-338-3p及其抑制剂的慢病毒表达载体,荧光显微镜下观察可见SW-620细胞表达绿色荧光.稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞株中,miR-338-3p表达水平显著高于阴性对照组(相对表达量3.91 ±0.51比2.36±0.44,P<0.01),SMO蛋白表达水平明显下降,且肿瘤细胞增殖能力减弱[细胞增殖抑制率(CPIR):(61.9±5.2)%比(41.6±4.8)%,P<0.01],细胞凋亡增加.稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株中,miR-338-3p表达水平显著低于阴性对照组(相对表达量0.92±0.29比2.36±0.44,P<0.01),SMO蛋白表达水平明显升高,且肿瘤细胞增殖能力增强[CPIR:(19.2±3.8)%比(41.6±4.8)%,P<O.01],细胞凋亡减少;而此种促增殖作用可被anti-SMO-siRNA部分逆转,说明此种生物学效应确由SMO所介导.结论 miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞生长。