【摘 要】
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目的 通过灌注加浸泡法制备全肾细胞外基质支架,并对该生物支架进行鉴定. 方法 健康成年SD大鼠20只,取肾,行肾动脉留置针插管,灌注压3.6mmHg,恒温37℃依次浸泡灌注肝素化PBS
【机 构】
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温州医学院人体解剖学教研室,温州医学院第一临床医学院,温州医学院微生物与免疫学教研室
【基金项目】
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浙江省新苗计划资助项目;温州市科技局资助项目;浙江省教育厅资助项目;国家自然科学基金
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目的 通过灌注加浸泡法制备全肾细胞外基质支架,并对该生物支架进行鉴定. 方法 健康成年SD大鼠20只,取肾,行肾动脉留置针插管,灌注压3.6mmHg,恒温37℃依次浸泡灌注肝素化PBS溶液、0.05％胰蛋白酶溶液、1％十二烷基硫酸钠(SDS)溶液、1％Trition X-100溶液以及含青、链霉素的PBS溶液.处理后,行DNA定量与定性分析,透射电镜、HE染色及免疫荧光观察残留细胞核成分,进一步丙烯腈-丁二烯-苯乙烯树脂(ABS)铸型观察肾内血管分布情况. 结果 去细胞组DNA含量较对照组下降了97％,琼脂糖凝胶电泳未见明显DNA条带；透射电镜、HE染色及免疫荧光观察去细胞组保留了大量细胞外基质,未见明显细胞核成分残留；铸型标本显示去细胞组血管较稀疏,分支完整、清晰. 结论 联合酶消化法与去垢剂洗涤法,经灌注加浸泡法处理的全肾,可有效清除肾内所有细胞成分,较好地保留细胞外基质支架和血管网络结构,是一种简单易行且较为理想的制备组织工程肾生物支架的方法.
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