【摘 要】
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为了系统的筛选位于猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白上的抗原优势区域,本研究将缺少N端核定位信号的Cap蛋白基因分成7个连续重叠的DNA片段cap(1～7),然后分别克隆于细菌展示载体AP
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室
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为了系统的筛选位于猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白上的抗原优势区域,本研究将缺少N端核定位信号的Cap蛋白基因分成7个连续重叠的DNA片段cap(1～7),然后分别克隆于细菌展示载体APEx中,IPTG诱导重组蛋白片段表达于细菌内膜外侧,采用流式细胞仪检测各片段和抗PCV2 Cap蛋白的多克隆抗体的结合能力.结果表明,cap(1～7)均可以和抗该Cap蛋白的多抗结合,并且cap6的结合能力最强.将cap6片段进一步分为连续不重叠的3段(cap6-1、cap6-2、cap6-3),以同样的方法鉴定抗原表位.结果显示,cap6-2与抗PCV2 Cap蛋白的多抗结合能力最强.此外,应用western blot的方法对细菌展示结果进行了验证.本研究利用细菌展示技术以及流式细胞仪快速的筛选了PCV2b Cap蛋白上的抗原优势区域,cap(1～7)片段均包含抗原表位,并且cap6是Cap蛋白上的抗原优势区域,cap6-2可能是抗原优势表位.
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