构建以壳聚糖(Chitosan,CS)为载体的屋尘螨第一变应原组分DNA疫苗(recombinanthousedustmitegroup1allergenvaccine,pVAXl.Derpl/CS),并观察探讨重组DNA疫苗鼻腔黏膜免疫小鼠后对变应性鼻炎(allergicrhinitis,AR)的预防作用及其作用机制。
方法复凝聚法制备pVAXl.Derpl/CS纳米粒,对其性质进行分析与鉴定。40只BALB/c小鼠随机分为5组:空白对照组(A组)、阴性对照组(B组,模型组)、空壳聚糖组(C组)、pVAXl-Derpl组(D组)、pVAXl-Derpl/CS纳米粒组(E组)。B、C、D和E组在第1、8天分别予20斗l的磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline,PBS)、CS、pVAXl-Derpl、pVAXl-Derpl/CS纳米粒双侧鼻腔交替滴药1次,第15、22天用1μgDerpl+4mgAI(OH)3400m进行腹腔注射致敏,第36天用20μ1的DerplPBS溶液(0.1μg/ILl)双侧鼻腔交替滴药进行局部激发7d,1次/日。末次激发后2h内处死,比较各组外周血Derpl特异性IgE(DerplspecificIgE,DerplsIgE)、白细胞介素(interleukin,IL)4、IL-10与r干扰素(interferon r,IFN—Jy)的水平,以及鼻黏膜组织炎性反应情况。
结果成功构建pVAXl-Derpl/CS纳米粒,其平均粒径为(205.3±12.8)nm,zeta电位为(30.5±5.6)mV。在鼻黏膜组织,B、C组呈明显的变态反应性炎症,D、E组变态反应性炎症较B、C组明显减轻。外周血清中DerplsIgE含量在D组[(109.6±14.5)ng/m1]和E组[(88.1±8.3)rig/m1]低于B组[(120.0±8.8)ng/m1],差异有统计学意义(t值分别为3.5、6.9,P值均<0.01);IL-4水平在D组[(192.5±10.2)pg/m1]和E组[(165.7±9.7)pg/m1]低于B组[(248.7±10.6)pg/m1],差异有统计学意义(t值分别为10.0、15.2,P值均<0.01);IFN-r水平在D组[(856。3±37.4)pg/m1]和E组[(904.8±37.7)pg/m1]高于B组[(709.0±26.5)pg/m1],差异有统计学意义(t值分别为8.2、10.8,P值均<0.01);IL-10水平在D组[(129.94±16.1)pg/m1]和E组[(107.1±11.8)pg/m1]低于B组[(160.6±24.2)pg/m1],差异有统计学意义(t值分别为2.9、5.5,P值均<0.05)。
结论以CS作为基因载体的pVAXl-Derpl/CS纳米粒有良好的DNA包封率,且能有效地抑制核酸酶对质粒DNA的降解;该DNA疫苗通过鼻腔黏膜给药方式对动物模型的AR有一定的预防作用。