【摘 要】
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对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)功能未知基因的研究,有利于全面揭示病毒的复制和感染机制.依据NCBI数据库发表的BmNPV T3株基因组序列(GenBank登录号:L33180.1),选择未知功能基
【机 构】
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浙江理工大学生命科学学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018
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对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)功能未知基因的研究,有利于全面揭示病毒的复制和感染机制.依据NCBI数据库发表的BmNPV T3株基因组序列(GenBank登录号:L33180.1),选择未知功能基因bm64进行生物信息学分析,该基因ORF全长333 bp,编码110个氨基酸,预测蛋白质分子质量为12.71 kD,等电点4.21.将Bm64蛋白亲水区1~49 aa的编码序列与原核表达载体pGEX-4T-3连接,构建重组表达质粒,转化E.coli Rosetta菌株后进行诱导表达.SDS-PAGE检测在预测分子质量处有明显的蛋白质条带,纯化该蛋白质并以此为抗原免疫新西兰大白兔,制备Bm64蛋白多克隆抗体.在病毒感染BmN细胞后24 h即可用Western blot方法检测到Bm64蛋白的表达.通过间接免疫荧光检测到Bm64蛋白在BmNPV感染的BmN细胞中表达,并定位于细胞核.研究结果为进一步分析家蚕核型多角体病毒bm64基因的功能奠定了实验基础.
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