【摘 要】
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为了研究DNA损伤反应中p27Kipl的表达及其调控机制,应用免疫印迹的实验结果表明:10Gy-60Coγ射线照射后3h,HeLa细胞中p27Kip1蛋白水平开始下降并持续到24 h,进而失去它对CDKs
【机 构】
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军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850
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为了研究DNA损伤反应中p27Kipl的表达及其调控机制,应用免疫印迹的实验结果表明:10Gy-60Coγ射线照射后3h,HeLa细胞中p27Kip1蛋白水平开始下降并持续到24 h,进而失去它对CDKs的抑制功能.Northern印迹结果显示,电离辐射(IR)对p27Kip1mRNA表达水平无明显影响,说明电离辐射诱导p27Kipl表达水平的降低主要与蛋白质降解相关,但其具体的调控机制还不清楚.已知在Gl-S期p27Kipl蛋白的降低主要依赖细胞周期蛋白E/Cdk2激酶将其磷酸化后的泛素化蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway).酶动力学研究结果揭示:电离辐射后细胞周期蛋白E/Cdk2激酶活性增高,12h细胞周期蛋白E/Cdk2激酶活性达到最大.当在照前用细胞周期蛋白E/Cdk2抑制剂olomoucine(10μmol/L)抑制细胞周期蛋白E/Cdk2激酶活性时,p27KipI蛋白表达水平增加.此外,还观察到电离辐射可诱导p27Kipl泛素化水平的增高,而在使用蛋白酶体抑制剂MG-132(5μmnol/L)处理HeLa细胞后,可抑制辐射诱导p27Kipl蛋白水平的下调.研究结果提示:泛素化蛋白酶体途径参与了辐射诱导P27Kipl蛋白表达下调的降解机制.
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