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在HAC-NaAC缓冲液中，辣根过氧化物酶催化H2O2氧化KI生成I2，过量的I^-可与I2结合形成I3，而I3^-分别与罗丹明S（RhS），罗丹明G（Rh6G），罗丹明B（RhB）和丁基罗丹明B（b-RhB）反应导致四体系在580，580，554和554nm处的荧光强度降低。在选择条件下，对于RhS，Rh6G，RhB，b-RhB四体系，辣根过氧化物酶的浓度分别在8～6400，40～4000，32～3200，40～6400Pg·mL^-1范围内与其荧光猝灭强度成线性关系，其检出限分别为3．2，3