【摘 要】
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水稻OsSGL(Oryza sativa stress tolerance and grain length)基因表达响应多种非生物逆境,参与调控水稻产量及耐旱性.该基因CDS全长768 bp,编码一个包含DUF1645(Domain of u
【机 构】
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湖南农业大学农学院,长沙,410128
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水稻OsSGL(Oryza sativa stress tolerance and grain length)基因表达响应多种非生物逆境,参与调控水稻产量及耐旱性.该基因CDS全长768 bp,编码一个包含DUF1645(Domain of unknown function protein family 1645)结构域的功能蛋白.生物信息学分析预测显示该蛋白分子量为26.73 kD,理论等电点为9.35,为亲水性蛋白且没有跨膜区域,蛋白二级结构中α螺旋占15.69％,β转角占3.14％,延伸链占14.51％,无规则卷曲占66.67％.OsSGL基因CDS序列中稀有密码子的比例高达29.69％,且有多个串联稀有密码子.为进一步在生化水平研究OsSGL蛋白,本研究拟在原核表达系统中大量表达、纯化并鉴定His标签融合表达的Os-SGL蛋白.在不改变氨基酸序列的前提下,通过全基因合成技术,根据大肠杆菌密码子偏好性对OsSGL CDS序列进行优化、合成并连接到pET-32a表达载体中;然后将重组质粒pET-32a-OsSGL转化大肠杆菌,经体外表达条件优化大量合成融合His标签表达的OsSGL蛋白.结果显示,OsSGL基因在大肠杆菌中可实现诱导表达,融合蛋白分子质量约为45.7 kD.最优诱导表达温度、时间、IPTG浓度和摇床转速分别为16℃、16h、0.5 mmol/L和120 r/min.利用His抗体进行Western blotting进一步检测到纯化的His-OsSGL融合蛋白.OsSGL蛋白体外表达体系的建立有利于在生化水平上深入解析OsSGL参与的信号调控通路.
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