【摘 要】
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为筛选并鉴定免疫反应原性良好的牛支原体(M.bovis)蛋白,本研究提取M.bovis TJ株脂质相关膜蛋白(LAMPs),通过AKTA分子筛筛选,将M.bovis LAMPs分为5组,经dot blot试验鉴定各组
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江 哈尔滨 150069
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为筛选并鉴定免疫反应原性良好的牛支原体(M.bovis)蛋白,本研究提取M.bovis TJ株脂质相关膜蛋白(LAMPs),通过AKTA分子筛筛选,将M.bovis LAMPs分为5组,经dot blot试验鉴定各组LAMPs的免疫反应原性,并经蛋白质谱分析其蛋白组分.结果显示,5组LAMPs中有1组膜蛋白反应原性较好,且结合蛋白匹配度得分的排名顺序和基因注释,选定P48、DnaK和L-LDH为候选蛋白.将该3种蛋白经原核表达、纯化及western blot检测其反应原性;并进一步分别以该3种重组蛋白为包被抗原,采用ELISA方法(rP48-ELISA、rDnaK-ELISA、rL-LDH-ELISA)检测并利用Graphpad prism 8软件分析并计算该3种方法的特异性、敏感性及其与牛鼻支原体、丝状支原体丝状亚种SC型、牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫病毒、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清的交叉反应性.Western blot结果显示,3种重组蛋白均能与M.bovis阳性血清反应,反应原性较好;ELISA结果显示,rP48-ELISA、rDnaK-ELISA、rL-LDH-ELISA方法的特异性分别为96％、94％和98％,敏感性分别为98％、92％和94％.交叉反应性试验结果显示,M.bovis rDnaK和rL-LDH均能与牛鼻支原体阳性血清发生交叉反应,而M.bovis rP48与牛其他临床常见呼吸道病原阳性血清均无交叉反应,表明其具有作为检测M.bovis ELISA方法候选包被抗原的潜力.本研究为进一步筛选M.bovis亚单位疫苗抗原及快速诊断方法的候选抗原奠定实验基础.
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