【摘 要】
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肠激酶(enterokinase,EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母
【机 构】
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重庆师范大学生命科学院; 成都地奥制药集团有限公司; 重庆师范大学生命科学院 重庆400047成都地奥制药集团有限公司成都610041; 成都610041; 成
【基金项目】
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国家"863"计划项目(2001AA215401)~~
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肠激酶(enterokinase,EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastorisSMD1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL(recombinant enterokinase light chain,rEKL)纯化、N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、N端15个氨基酸序列与文献报道一致.图5参17
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