南瓜蚜传黄化病毒P0蛋白基因ihpRNA载体构建及烟草转化

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P0蛋白是南瓜蚜传黄化病毒基因组编码的基因沉默抑制子。根据已克隆的CABYVP0蛋白基因序列,设计带酶切位点的特异性引物,PCR扩增用于构建RNAi表达载体的PO蛋白基因正反义片段。将正反义片段分别插入到含有内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint—P0-F-R。用SalI和SacI双酶切pBSint—P0-F-R,将切下的包括内含子和正反义PO蛋白基因在内的片段定向克隆到植物表达载体pCambia1300上,得到含有发卡结构的RNAi表达载体pCambia-P0-F—R。通过农杆菌
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