【摘 要】
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目的 探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞；采用荧光定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达；流式细胞仪(FCM)法检测转染前后各细胞凋亡率的变化；JC-l染色法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化；荧光定量R
【机 构】
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目的 探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞；采用荧光定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达；流式细胞仪(FCM)法检测转染前后各细胞凋亡率的变化；JC-l染色法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化；荧光定量RT-PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化；将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤,TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡.结果 建立了稳定表达WWOX基因的QBC939/WWOX细胞株,mRNA及蛋白表达明显增加.FCM显示QBC939/WWOX组的细胞凋亡率明显增高[(1.24±0.35)％比(1.73±0.48)％比(21.40±2.35)％,P＜O.01],JC-l显示转染组的线粒体膜电位下降[(4.27±0.64)％比(4.96±0.52)％比(28.60±3.94)％,P＜O.01],bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低(P＜0.05).转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢(P＜0.05),TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为(13.6±1.5)％,较对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.O1).结论 WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡,其机制可能与下调bcl-2的表达,激活线粒体凋亡通路有关。
其他文献
目的 将构建好的携带GAD65的永生化神经前体细胞(INPCs-GAD65)移植到癫痫大鼠的脑内,观察这些细胞在癫痫大鼠脑内的存活及对癫痫大鼠的治疗作用.方法 INPCs-GAD65用超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)标记后,MRI扫描追踪观察细胞的存活状况;观察对照组、实验组大鼠在行为学、脑电图的改变;免疫组织化学观察其分化.结果 行1.5T MRI检查,见移植处在T2WI呈低信号改变,移植后7
我们用四色流式细胞术准确界定CD4+ CD25high Foxp3+ Treg,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测Treg的特异性功能基因Foxp3 mRNA的表达水平,分析不同分期膀胱癌患者的该群细胞数量、膀胱癌不同部位的分布及Foxp3的表达差异与膀胱癌临床TNM分期的关系,探讨Treg在膀胱癌患者中表达水平及临床意义。
目的 观察醛固酮对主动脉Fibulin-5表达的影响.方法 将32只SD大鼠随机分为4组,每组8只:(1)空白溶剂设为对照(60%丙二醇+10%乙醇+30%双蒸水);(2)醛固酮腺瘤:泵入醛固酮(1 μg/h);(3)醛固酮腺瘤+特异性盐皮质激素受体阻断剂:依普利酮[100 mg/(kg·d)];(4)醛固酮腺瘤+血管扩张剂:肼苯哒嗪[25 mg/(kg·d)].渗透泵内分别注入醛固酮或空白溶剂,
本研究旨在建立大鼠门静脉置管并体外留置模型,现报道如下. 一、材料和方法 1.动物:SPF级SD大鼠,雄性,体质量(200±20)g,购自广东医学院实验动物中心,动物合格证编号:A2009029。
对实质性脏器的缝扎止血是必要的,但易导致组织切割破损,造成裂口出血或针眼出血;另外,缝扎止血可影响脑、肾、肝等重要脏器功能[1].对实质性脏器创面出血的治疗仍然是外科领域面临的难题[2].对此,美国Medafor公司研发了Arista止血粉,并显示了很好的安全性及较好的止血效果,但其价格昂贵.我们采用一种新的方法,制备出多孔性更明显的多孔止血淀粉(PHS).本研究旨在观察PHS的制备并观察其在肝脏
目的 模拟人工低温,并对低温后的血流动力学变化进行分析.方法 体表降温法建立人工低温模型,降温到32℃.检测降温前后主动脉压、中心静脉压、左房压、肺动脉压、肺动脉血流量等指标.比较37℃、32℃各项指标.按"肺血管阻力=80×(肺动脉平均压-左房平均压)/心输出量"公式计算肺血管阻力.结果 37℃时,肺血管阻力为(42.100±22.290)kPa·s/L,32℃时为(61.463±29.454)
亚硒酸钠为硒的无机盐形式,硒是人体的微量元素,具有广泛的生物学功能,特别是对多种肿瘤的生长具有抑制作用,但有关硒对胰腺癌细胞的抑制作用报道尚少.本研究旨在观察亚硒酸钠诱导胰腺癌PANC-1的生长的影响,探讨其诱导凋亡机制。
c-myc内含子结合蛋白1(MIBP1)基因是c-myc的上游调控基因之一,在前期的工作中我们检测了该基因在人脑胶质瘤中的表达,并完成了全长基因测序,Genebank注册:DQ231041,并构建了完整的MIBP1基因的真核表达载体pLX-SN-MIBP1[1].我们将此基因转染到胶质瘤细胞株SHG-44中,观察对人脑胶质瘤细胞的作用。
目的 探讨蛋白磷酸酶2A（PP2A）抑制剂斑蝥素和冈田酸通过激活核因子-κB（NF-κB）通路诱导胰腺癌细胞株PANC-1凋亡的作用机制。方法PP2A抑制剂处理胰腺癌细胞后，噻唑蓝（MTT）检测细胞活力，流式细胞术检测凋亡水平，Westernblot检测NF-κB通路的激活水平。结果PP2A抑制剂显著抑制胰腺癌细胞活力，呈剂量和时间依赖性，并可诱导细胞凋亡；PP2A抑制剂激活NF-κB通路的上游激
肝癌的侵袭和转移已成为制约进一步延长肝癌患者生存期,提高远期疗效的严重瓶颈,也是提高肝癌疗效的关键所在,因此对于肝癌的侵袭转移的研究迫切需要能够真正模拟肝癌在人体内自然生长、侵袭及转移全部过程的动物模型,建立合适的肝癌侵袭转移模型,是研究肝癌侵袭转移及相应干预措施的必备平台.随着目前对肝癌侵袭转移研究的深入,相关模型的建立和技术也不断发展,各种肝癌侵袭转移模型都有所建立,建立更好的、更适宜的转移模